Optimisation of extraction conditions and chromatographic separation of the cannabinoid group in an oil matrix

Celem niniejszej pracy była optymalizacja warunków ekstrakcji oraz chromatograficznego rozdzielenia grupy kannabinoidów w matrycy olejowej. Po przeprowadzeniu walidacji opracowanej metody przeprowadzono analizę jakościową oraz ilościową otrzymanych do badań olejków kannabinoidowych. Wykonano ekstrakcję preparatów z wykorzystaniem 96% etanolu jako ekstrahenta. Analizę chromatograficzną przeprowadzono z wykorzystaniem wysokosprawnej chromatografii cieczowej z detekcją diodową (HPLC-DAD), fazę ruchomą stanowił: 0,5% kwas octowy (faza A) oraz acetonitryl (faza B). Całkowity czas analizy jednej próbki był równy 27 minut. Oznaczono osiem kannabinoidów. Każdy z nich wykazywał liniowość na poziomie stężeń 0,625 – 10 μg/100 mg matrycy, z współczynnikiem korelacji R > 0,99901, dla zastosowanej funkcji liniowej. Metoda została zwalidowana poprzez wyznaczenie podstawowych parametrów walidacyjnych z wykorzystaniem roztworów CRM zawierających analizowane kannabinoidy na dwóch poziomach stężeń: 2 i 7,5 μg/mL, były to: dokładność RE [%] = 0,13 – 10,67 oraz 1,97 – 3,14, precyzja RSD [%] = 4,26 – 6,45 oraz 0,21 – 1,72, powtarzalność CV [%] = 2,46 – 3,72 i 0,12 – 0,99. Oszacowano również poziomy LOD [μg/mL] = 0,084 – 0,314 oraz LOQ [μg/mL] = 0,280 – 1,048. Analizie poddano 14 próbek rzeczywistych: 12 olejków dla ludzi oraz 2 przeznaczone dla zwierząt. W tych pierwszych zawartość CBD wynosiła 0,23 – 23,92%, a w pozostałych dwóch CBD oznaczono na poziomie 1,85 – 4,79%. Zgodność z deklarowaną przez producentów zawartością CBD wahała się w przedziale od -53,45% do -4,38%. Oznaczono również: CBDA na poziomie 0,003 – 2,10%, CBGA: 0,001 – 2,21%, CBG: 0,002 – 2,96%, THCV: 0,0007-0,02%, CBN: 0,001 – 0,15%, 9-THC: 0,001 – 1,65%, THCA-A: 0,01 – 0,03%.

The aim of this work was to optimise conditions of liquid – liquid extraction and high-performance liquid chromatography with diode array detection (HPLC-DAD) method, which was used to analyse group of cannabinoids in an oil matrix. Cannabinoids were extracted using 96% ethanol. HPLC analysis was performed. The mobile phase was: 0,5% acetic acid (phase A) and acetonitrile (phase B). The total run time was equal to 27 minutes. Eight cannabinoids were determined. Each reached the linear range of 0,625 – 10 μg/100 mg oil matrix with coefficient of correlation R > 0,99901. The method was validated using CRMs. Basic validation parameters were determined for each analyte at two concentration levels: 2 and 7,5 μg/mL, respectively: accuracy – RE [%] = 0,13 – 10,67 and 1,97 – 3,14, precision – RSD [%] = 4,26 – 6,45 and 0,21 – 1,72, repeatability – CV [%] = 2,46 – 3,72 and 0,12 – 0,99. LOD and LOQ were also estimated. LOD reached values from 0,084 to 0,314 [μg/mL], while LOQ was equal 0,280 – 1,048 [μg/mL]. The analysis of fourteen oil samples was performed – two of them were produced for animals and twelve for people. The concentration level of CBD in oils designed for people reached values from 0,23 to 23,92%, while in animal type the concentration of CBD was in the range 1,85 – 4,79%. Compliance with the declared amount ranged from -53,45% to -4,38%. Other cannabinoids were also determined: CBDA: 0,003 – 2,10%, CBGA: 0,001 – 2,21%, CBG: 0,002 – 2,96%, THCV: 0,0007-0,02%, CBN: 0,001 – 0,15%, 9-THC: 0,001 – 1,65%, THCA-A: 0,01 – 0,03%.