Opracowanie walidacji metody i test przydatności systemu do oznaczania alkaloidów w farmaceutykach przy użyciu chromatografii cieczowej z detekcją spektrometrii masowej

Dokładna analiza alkaloidów w lekach jest ważna, ponieważ ich działanie terapeutyczne lub szkodliwe zależy od ich ilości. Dlatego celem niniejszej pracy było opracowanie metody chromatografii cieczowej sprzężonej ze spektrometrią mas (LC-MS) do ilościowego oznaczania alkaloidów morfiny, atropiny i skopolaminy w produktach farmaceutycznych wraz systemem kontroli metodyprzydatności systemowej. Opracowana procedura analityczna wykorzystuje fazę ruchomą gradientem układzie gradientowym wykorzystując mieszaninę wody z 0,1% kwasem mrówkowym:metanol 0,1% kwasu mrówkowego, szybkość przepływu 0,400 ml/min oraz kolumnę C18 Shim-pack Scepter. Analiza obejmowała wyznaczenie MRM z następującymi wybranymi przejściami dla każdego analitu: morfina: 286,25 > 165,05 m/z; atropina: 290,15 > 124,10 m/z; skopolamina: 304,30 > 156,10 m/z. Kalibracja obejmowała stężenia od 62,5 ƞg / ml do 1000 ƞg / ml każdego analitu, a LOD wynosiło 1,5 ƞg / ml dla morfiny i 0,075 ƞg / ml dla atropiny i skopolaminy. Metoda wykazała zadowalającą precyzję, prezentując jednodniowy RSD% poniżej 4,0% dla wszystkich trzech analitów i pośrednią precyzję z CV% między dniami poniżej 4,5% dla wszystkich analitów. Regresja liniowa cechowała się współczynnikiem R2 ≥ 0,99 dla wszystkich analitów. Przydatność systemu została oceniona na podstawie obszaru i czasu retencji RSD % oraz współczynnika ogonowania trzech analitów z pięciu wstrzyknięć jednego roztworu SST. Ponadto w próbce można było wykryć ergotaminę przy wybranych przejściach MRM: 582,15 > 564,10; 223,10; 208,05 m/z. Morfina, atropina, skopolamina i ergotamina zostały pomyślnie rozdzielone i zidentyfikowane. Jednak niektóre wyniki sugerują, że zmiany w metodologii, takie jak dodanie wzorca wewnętrznego jak również przygotowanie próbki tabletki, mogłyby poprawić proces analityczny.

The accurate analysis of alkaloids in medicinal drugs is important as their therapeutic or harmful effects are quantity dependent. Therefore the aim of this thesis was to develop a liquid chromatography coupled mass spectrometry (LC-MS) method for quantifying the alkaloids morphine, atropine and scopolamine in pharmaceutical products with its system suitability test. The analytical procedure developed utilizes a mobile phase with a gradient of water 0.1% formic acid:methanol 0.1% formic acid, a flow rate of 0.400 mL/min, and a C18 Shim-pack Scepter column. Analysis involved MRM determination with the following selected transitions for each analyte morphine: 286.25 > 165.05 m/z; atropine: 290.15 > 124.10 m/z ; scopolamine: 304.30 > 156.10 m/z. Calibration concentration ranged from 62.5 ƞg/mL to 1000 ƞg/mL of each analyte, and LODs are 1.5 ƞg/mL for morphine and 0.075 ƞg/mL for atropine and scopolamine. The method showed satisfactory precision by presenting an intraday RSD % below 4.0 % for all three analytes and an intermediate precision with a CV % between days lower than 4.5 % for all analytes. Linear regressions presented R2 ≥ 0.99 for all analytes. System suitability was evaluated by the area and retention time RSD % and tailing factor of the three analytes from five injections of one SST solution. In addition, ergotamine could be qualified in the sample at selected MRM transitions: 582.15 > 564.10; 223.10; 208.05 m/z. Morphine, atropine, scopolamine and ergotamine were successfully separated and identified. However, some results suggested that changes in methodology, such as the addition of an internal standard as well as tablet’s sample preparation, could improve the analysis.