The study of the enzymatic activity of serine proteases present in neutrophil granules

Neutrofile należą do białych krwinek, które pełnią istotną rolę w odpowiedzi wrodzonej. W warunkach prawidłowych krążą we krwi. Migrują do tkanki, w której toczy się proces zapalny, w odpowiedzi na bodziec chemotaktyczny. Dzięki zdolności do fagocytozy oraz tworzeniu sieci neutrofilowych mogą w efektywny sposób zwalczać bakterie i grzyby. Neutrofile posiadają w cytoplazmie charakterystyczne ziarnistości, w których wnętrzu znajdują się proteazy serynowe. To dzięki nim neutrofile są zdolne do niszczenia patogenów, wykorzystując tak zróżnicowane mechanizmy. Istnieją liczne możliwości badania enzymów. Wśród nich znajduje się mikroskopia, cytometria przepływowa, spektrofotometria, czy test ELISA. Niektóre z nich pozwalają na oznaczenia ilościowe, inne na jakościowe. W zależności od użytej metody materiałem badawczym mogą być komórki bądź lizaty komórkowe. W związku z powyższym zastosowano technikę, która pozwala zarówno na weryfikację obecności jak i aktywności enzymatycznej. Narzędziem tym są sondy molekularne sprzężone z fluorochromem. Dotychczas opublikowane artykuły opisywały działanie tych sond na proteazy serynowe obecne w ludzkich neutrofilach, dlatego w pracy tej skupiono się na weryfikacji, czy ich działanie będzie równie specyficzne w komórkach mysich. W tym celu dokonano oceny obecności oraz aktywności proteaz serynowych w neutrofilach.

Neutrophils belong to white blood cells that play an important role in the innate immunity system. Under normal conditions, they circulate in the blood. It migrates to the area of the tissue, where the inflammatory processes take place in response to a chemotactic stimulus. Thanks to their ability to phagocytose and create neutrophil extracellular traps (NET) they can effectively fight bacteria and fungi. In the cytoplasm, neutrophils have characteristic granularities in which serine proteases are found. It is thanks to them that neutrophils are able to destroy pathogens using such a variety of different mechanisms. There are various methods of enzyme analysis, for example microscopy, flow cytometry, spectrophotometry and ELISA. Some of them allow for quantitative, others for qualitative analysis. Depending on the method used, the research material may be cells or cell lysates. In this project a technique was used that allows for verification of both the presence and the enzymatic activity of serine proteases. To determine this, a toolbox of fluorescent probes was used. Previously published articles have described the effects of these probes on serine proteases present in human neutrophils. Therefore, this study focuses on verifying whether their effect will be equally specific in mouse cells. For this purpose, the presence and activity of serine proteases in neutrophils was assessed.