Detection of extracellular proteolytic proteins of Candida albicans by zymography

Grzyby z gatunku Candida albicans produkują zewnątrzkomórkowe białka proteolityczne, do których należą kwaśne proteazy z rodziny Sap (ang. Secreted aspartic proteases). Enzymy te wydzielone do pożywki hodowlanej mogą zostać wykryte przy pomocy techniki elektroforetycznej – zymografii. Polega ona na rozdziale białek w stałym polu elektrycznym, w żelu poliakrylamidowym zawierającym substrat dla badanych enzymów oraz warunkach semidenaturujących. Pozwala ona na renaturację i przywrócenie aktywności enzymatycznej. Degradacja substratu powoduje przejaśnienia w wybarwionym żelu.

The fungus Candida albicans produces extracellular proteolytic proteins, including acidic proteases belonging to the family of Saps (secreted aspartic proteases). The enzymes released to the culture medium can be detected by electrophoretic technique – zymography. Zymography uses a separation of proteins in constant electric field, in a polyacrylamide gel containing a substrate for the enzymes of interest and in semidenaturating conditions. It allows to renaturate proteins and restore their enzymatic activity. Degradation of substrate causes the bands of clearing in the stained gel.