Influence of fatty acids on the level of MCPIP1 and PPARγ proteins in Huh7 cells

Niealkoholowa stłuszczeniowa choroba wątroby (NAFLD) jest schorzeniem powszechnie występującym w krajach wysoce rozwiniętych. Charakteryzuje się ona wzmożoną akumulacją lipidów wewnątrz hepatocytów, a w konsekwencji rozwojem chronicznego stanu zapalnego. Ze względu na funkcje pełnione przez białko MCPIP1 oraz PPARγ w powyższej pracy zbadano ich rolę w przebiegu NAFLD. Kodowane przez gen ZC3H12A białko MCPIP1 (ang. monocyte chemoatractant protein-induced protein 1) zaliczane jest do endorybonukleaz. Dzięki swoim RNazowym właściwościom białko to reguluje wiele istotnych procesów zachodzących w organizmie. Degradując transkrypty cytokin prozapalnych pełni ono rolę negatywnego regulatora stanu zapalnego. Ponadto wpływa ono hamująco na proces adipogenezy poprzez degradację transkryptu C/EBPβ. Receptory PPARγ natomiast są czynnikami transkrypcyjnymi, których ekspresja zachodzi tkankowo-specyficznie. Najwyższa ekspresja widoczna jest w tkance tłuszczowej, ale można ją również zaobserwować w wątrobie. Receptory PPARγ regulują proces adipogenezy, wpływają na funkcjonowanie tkanki tłuszczowej, ale także odpowiadają za biosyntezę lipidów. W prowadzonych badaniach zastosowano popularny model in vitro w badaniach NAFLD – linię komórkową Huh7. Stosowano komórki Huh7 typu dzikiego oraz komórki Huh7 z indukowaną nadekspresją białka MCPIP1 w systemie Tet-on. Komórki stymulowano przez 24h palmitynianem sodu oraz oleinianem sodu w różnych dawkach. Ponadto dla stężenia 0,5 mM oleinianu sodu inkubację wydłużono do 9 dni. Zaobserwowano iż w wyniku krótkotrwałej stymulacji komórek odpowiednią dawką kwasów tłuszczowych dochodzi do zwiększenia ilości białka MCPIP1. Długotrwała inkubacja skutkowała natomiast spadkiem ilości białka. Analogiczne wyniki otrzymano dla białka PPARγ. W przeprowadzonych doświadczeniach udało się wykazać iż poziom białka PPARγ regulowany jest przez białko MCPIP1.

Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) is a common disorder in highly developed countries. It is characterized by increased lipids accumulation inside hepatocytes and consequently progression of chronic inflammation. Due to MCPIP1 and PPARγ functions their roles were researched in NAFLD course. MCPIP1 (monocyte chemoatractant protein-induced protein 1) protein encoded by ZC3H12A gene belongs to endoribonucleasis. Thanks to its RNase properties this protein regulates many important metabolism processes in human body. By degradation of proinflammation cytokines it perfroms the function of negative regulator of inflammation. It also detains the adipogenesis process by degradation of C/EBPβ transcript. PPARγ recepetors, on the other hand, are transcription factors, which expression is tissue-specific. The highest expression is visible in fat tissue but it is possible to observe it in liver. PPARγ receptors regulates adipogenesis and influences the functioning of fat tissue and moreover are responsible for lipids biosynthesis. Experiments were performed in popular in NAFLD researches in vitro model – Huh7 cell line. Specifically wild type Huh7 and Huh7 with inducted MCPIP1 overexpression in Tet-on system were used. Cells were stimulated for 24h with sodium palmitate and sodium oleate in different doses. Furthemore for 0,5 mM sodium oleate incubation were prolonged to 9 days. The effect of observation was that in short-time incubation with proper dose of fatty acids led to increase of MCPIP1 level. In a contrast, long term incubation effects in protein level drop. Similarly results were received for PPARγ. In carried experiments it was proven that PPARγ level is regulated by MCPIP1.