Developing of ELISA for hIL-6

Interleukina 6 początkowo została zidentyfikowana u człowieka jako czynnik niezbędny do różnicowania komórek B w plazmocyty produkujące przeciwciała. Dziś wiadomo, że cytokina ta wykazuje działanie wielokierunkowe. Ponieważ hIL-6 jest produkowana po stymulacji przez wiele różnych komórek, a także sama może być aktywować wiele procesów, jej ekspresja i działanie są przedmiotem wielu badań. Powszechnie używaną metodą potwierdzenia jej obecności w próbkach jest test ELISA. W niniejszej pracy konstruowanio własny test immunoenzymatyczny, uzyskując nadekspresję genu dla hIL-6 i oczyszczając produkowane białko. W kolejnych etapach immunizowano myszy dla pozyskania przeciwciał poli- i monoklonalnych skierowanych przeciwko hIL-6. Transfekowane komórki U373 MG produkują znaczną ilość hIL-6, jednakże wydzielają inne, bardziej immunogenne białko. Brak powodzenia w uzyskaniu przeciwciał monoklonalnych i niewielka ilość poliklonalnych specyficznych wobec hIL-6 wynikał najprawdopodobniej z immunizacji nieoczyszczonym antygenem. Pula przeciwciał poliklonalnych skierowanych przeciwko hIL-6 może znaleźć zastosowanie, po wcześniejszej biotynylacji, jako przeciwciała detekcyjne w stworzonym w przyszłości teście ELISA. Skonstruowano plazmid dla białka fuzyjnego hIL-6, zawierający sekwencję metki histydynowej. Nowa pula transfekowanych komórek oraz transformowane bakterie stanowią potencjał produkcyjny, co umożliwi uzyskanie dużej ilości białka oraz uzyskanie czystego preparatu hIL-6.

Interleukin 6 was originally identified in humans as a crucial factor for differentiating B cells into antibody-producing cells. Today it is known that this cytokine shows omnidirectional action. Because hIL-6 is produced, after stimulation, by many different cells and it itself can activate many processes, its expression and action are subject to a lot of research. The enzyme-linked immunosorbent assay is widely used to confirm the presence of hIL-6 in samples. In this experiment, ELISA has been constructed by overexpressing the hIL-6 gene and protein purification. In subsequent stages, mice were immunized to obtain anti-hIL-6 polyclonal and monoclonal antibodies. Transfected cells produced a significant amount of hIL-6, however, they also secreted other, more immunogenic proteins. The lack of success in obtaining monoclonal antibodies and the small number of polyclonal antibodies specyfic for hIL-6, most likely resulted from immunization with antigen, which hasn’t been puryfied. The anti-hIL-6 polyclonal antibodies may be used, after prior biotinylation, as detection antibodies in the future ELISA test. A plasmid for the hIL-6 fusion protein, containing the histidine tag sequence was constructed. The new pool of transfected cells and transformed bacteria provide the potential for production, resulting in a large amount of protein and a pure hIL-6 preparation.