Obtaining recombinant human transcription factor Yin Yang 2 and investigating its spectroscopic properties

Yin Yang 2 jest występującym u ssaków łożyskowych czynnikiem transkrypcyjnym. Wykazano, że reguluje wiele istotnych biologicznych procesów takich jak wzrost i dojrzewanie. Jest retropozonem Yin Yang 1 - bardzo istotnego i powszechnego czynnika transkrypcyjnego. Ze względu na to pokrewieństwo i szereg innych przesłanek, sprawdzenie, czy domena N-końcowa YY2 wykazuje nieuporządkowanie struktury jest ważnym tematem. Białka samoistnie nieuporządkowane charakteryzują się niską zawartością lub brakiem struktur drugorzędowych w formie natywnej.Niniejsza praca polegała na uzyskaniu konstruktu z genem ludzkiego czynnika transkrypcyjnego Yin Yang 2 w wektorze do ekspresji w Escherichia coli, produkcji białka oraz optymalizacji jego oczyszczania. Następnie przeprowadzono wstępne pomiary spektroskopowe - zmierzono widma fluorescencji oraz dichroizmu kołowego. Wymienionymi metodami badano procesy denaturacji chemicznej oraz, w przypadku CD, również denaturacji termicznej. Efektem pracy są wstępne rezultaty wskazujące, że N-końcowy fragment wykazuje cechy białka samoistnie nieuporządkowanego.

Yin Yang 2 is a transcription factor present in placental mammals. It's involved in many crucial biological processes such as growth and maturation. It is a retroposon of Yin Yang 1 - an important and widespread transcription factor. Because of that relationship and some other evidence it is believed that verification if the N-terminal fragment of YY2 contains disordered structures is an important issue. Intrinsically disordered proteins have low content or no content of secondary structures in their native form. The aim of the following thesis was to obtain a construct of YY2 gene in plasmid vector, find optimal conditions of expressing and purifying the protein. Results of basic spectroscopic measurements, using fluorescence and circular dichroism spectroscopy, are also presented. The preliminary results suggest that YY2's N-terminal fragment has attributes of an intrinsically disordered protein.