Preparation a functional genetic construct of G-protein αi1 subunit and fluorescent protein: mGFP, Citrine and mCherry

Receptory sprzężone z białkami G (G Protein-Coupled Receptor) stanowią jedną z najbardziej różnorodnych grup receptorów transbłonowych. Poprzez związanie ze specyficznym ligandem receptor ulega aktywacji i oddziałuje z ulokowanym w wewnętrznej części błony trimerycznym białkiem G, zbudowanym z podjednostek α, β i γ, będącym swoistym „przełącznikiem molekularnym” o aktywności GTPazy. Celem pracy było otrzymanie konstruktów podjednostki Gαi1 z białkami fluorescencyjnymi: mGFP, Citrine oraz mCherry. Stworzenie białka fuzyjnego podjednostki αi1 białka G o funkcji inhibitorowej z białkiem fluorescencyjnym pozwoli na analizę jego lokalizacji w błonie oraz umożliwi poznanie mechanizmu przekazywania wewnątrzkomórkowych sygnałów za pośrednictwem białek G.

GPCRs (G Protein-Coupled Receptors) are one of the most diverse group of transmembrane receptors presented in living cells. Binding of a specific ligand cause conformational changes and activate the receptor to interact with G proteins. Trimeric G proteins contain α, β and γ subunits. The result of activation of GPCR is replacement GDP into GTP bound to the α subunit and dissociation of complex into activated α subunit and βγ dimer which are engaged in various intracellular signal pathways. The main goal of this project was preparing functional genetic construct of Gαi1 subunit and fluorescent protein: mGFP, Citrine and mCherry. Creating a fluorescent fusion protein withGαi1 subunit allow to analyze G protein plasma membrane localization and study of G protein- dependent mechanisms of signal transduction.