Development and validation of HPLC method for determining balofloxacin next its degradation products.

Balofloksacyna jest chemioterapeutykiem o szerokie spektrum działania przeciwbakteryjnego należącym do IV generacji fluorochinolonów. Chemicznie, jest to kwas 1-cyklopropylo-6-fluoro-8-metoksy-7-(3-metyloaminopiperydyn-1-ylo)-4-okso-3-chinolinokarboksylowym. Celem tej pracy było opracowanie metody oznaczenia balofloksacyny obok jej produktów fotodegradacji, a następnie walidacja stworzonej metody.Balofloksacyne oraz jej produkty fotodegradacji oznaczano stosując wysokosprawną chromatografię cieczową z detekcją spektrofotometryczną w zakresie UV. Użyto kolumnę Kinetex 5u XB-C18 100 A, o wymiarach 250 x 4,6 mm i rozmiarze ziaren 5µm, zaś fazę ruchomą stanowiła mieszanina buforu fosforanowego o pH 3,0 i acetonitrylu w stosunku 80:20 (v/v). Szybkość przepływu to 1 ml/minutę, a czas analizy wynosił 40 minut. Opracowaną metodę zwalidowano, określając: specyficzność, liniowość, precyzję, precyzję pośrednią, granicę wykrywalności, granicę oznaczalności oraz elastyczność.Stosując dane warunki uzyskano piki, które były dobrze rozdzielone, a pik pochodzący od rozpuszczalnika nie przeszkadzał przy oznaczeniu badanej substancji oraz produktów fotodegradacji. Metoda ma szeroki zakres liniowości, przy współczynniku korelacji R=0,9947 oraz dobrą precyzję, przy RSD nieprzekraczającym 0,73% i dobrą precyzję pośrednią, której RSD nie przekracza 0,87%. Wyznaczono granicę oznaczalności oraz wykrywalności, która dla balofloksacyny wynosiła odpowiednio 0,3936 mg/ml i 0,1299 mg/ml. Dokładność wyrażona przez procent odzysku mieściła się w granicach 98,25% – 102,15%. Zmiana pH buforu fosforanowego i zmiana szybkości przepływu fazy ruchomej wpływały na wyniki analizy.

Balofloxacin is a chemotherapeutic agent that possesses a wide spectrum of antibacterial protection which belongs to IV generation of fluoroquinolones. Ina chemistry sign it is called 1-Cyclopropyl-6-fluoro-8-methoxy-7-(3-methylaminopiperidin-1-yl)-4-oxoquinoline-3-carboxylic acid.The aim of working was to create a method to define balofloxacin with its products of photdegradation and a validation of the method that was made.Balofloxacin and its products of photdegradation were defined by a high-performance liquid chromatography with spectrophotometric detection in a range UV.The column Kinetex 5u XB - C18 100A was used that has 250x460 mm size and it has got seeds in the size 5µm. A move phase was composed of a mixture of phosphate buffer of pH 3,0 and acetonitrile in a ratio 80:20 (v/v).The speed of transfer is 1ml per a minute and the time of analysis is 40 minutes. The method that was made was validated defining: specificity, linearity, accuracy, precision, indirect, limit of detection, limit of quantification and flexibility.Using the data obtained conditions peaks which were well separated, and the peak derived from the solvent does not interfere with the assay of the test substance and photodegradation products.The method possess a wide range of linearity by a factor of correlation R=0,9947 and a good precision by RSD that does not limit 0,73% and a good intermediate precision that RSD does not limit 0,87%.The limit of the determination and detection was defined that for balofloxacin was respectively 0,3936mg/ml and 0,1299 mg/ml. An accuracy that was expressed by recovery percent was between 98,25 % to 102,15%. The changing of phosphate buffer and changing of the speed of transfer of the move phase influenced on the results of the analysis.