Determination of permethrin in urine using the cloud point extraction and high performance liquid chromatography with spectrophotometric detection

Głównym założeniem pracy magisterskiej było opracowanie metody ekstrakcji w punkcie zmętnienia, która umożliwiłaby wyodrębnienie permetryny z moczu celem oznaczania jej w próbkach tego materiału techniką HPLC-UV.Próbki moczu przygotowywano do analizy z zastosowaniem ekstrakcji w punkcie zmętnienia (CPE) przy użyciu niejonowego surfaktanta Tritonu X-114. Jako optymalne warunki CPE przyjęto: niezmodyfikowany odczyn próbek, stężenie surfaktanta 5% (w/v), wirowanie przez 5 minut (10 000 rpm), osuszenie fazy micelarnej pod strumieniem azotu przez 60 min. w temp. 40°C i rozpuszczenie jej w 100 µl acetonitrylu. Chromatografowanie ekstraktów moczu prowadzono na kolumnie typu C18 w warunkach gradientowych, a jako fazę ruchomą stosowano acetonitryl i wodę dejonizowaną, przy przepływie 1 ml/min. Detekcję analitu prowadzono przy λ= 210 nm. Jako wzorzec wewnętrzny zastosowano alprazolam. Parametry walidacyjne metody to: zakres liniowości 0,25 – 2 µg/ml, granica detekcji (LOD) - 0,005 µg/ml, granica oznaczalności (LOQ) - 0,015 µg/ml. Współczynnik zmienności (CV) dla pomiarów w ciągu dnia i między dniami na niższym poziomie stężenia permetryny (0,25 µg/ml) wynosił, odpowiednio 7,08% i 6,06%. Współczynnik ten dla pomiarów w ciągu dnia na wyższym poziomie stężenia permetryny (1 µg/ml) wynosił 13,61%. Odzysk pestycydu na niższym poziomie stężenia wynosił 71,2% (I dzień) i 80,1% (II dzień), a na wyższym poziomie stężenia - 108,7%.Na podstawie uzyskanych wartości parametrów walidacyjnych stwierdzono, że opracowana metoda umożliwia monitorowanie stężenia permetryny w moczu u osób narażonych na tę substancję.

The main aim of my master thesis was elaboration of cloud point extraction method which will enable to isolate permethrin from urine for determination it in this material by the HPLC-UV technique.Urine samples were prepared for analysis with use of a cloud point extraction (CPE) method employing the non – ionic surfactant Triton X – 114. As the optimum conditions for CPE were admitted: not modified sample pH, 5% (w/v) Triton X- 114, equilibration at 40°C for 20 min, centrifugation at 10,000 rpm for 5 min, drying of the micelar phase at 40°C for 60 min and its dilution with acetonitrile (100 µl).Chromatographing of urine extracts was performed on a C18 type column under gradient conditions using a mobile phase – acetonitril and deionized water with the flow rate being 1 ml/min. Detection of analyte was performed at wave length λ=210 nm. As the internal standard (IS) alprazolam was used. The validation parameters were: range of linearity: 0,25 – 2 µg/ml, LOD - 0,005 μg/ml, LOQ - 0,015 μg/ml. Coefficients of variation for intra-day and inter-day measurements at permethrin lower concentration level (0,25 µg/ml) were 7,08% and 6,06%, respectively. Coefficient of variation for intra-day measurements at permethrin higher concentration (1 µg/ml) level was 13,61%. Recoveries of the pesticide at the lower concentration level were: 71,2% (one day) and 80,1% (other day), and at the higher concentration level the recovery was 108,7%.On the base of the achieved validation parameters it may be stated that the developed method is able to monitor permethrin concentrations in urine of persons who were exposed to this substance.