Chromatographic analysis of stevioside and rebaudioside A in sweeteners

Ostatecznym wynikiem pracy było opracowanie nowej, prostej, szybkiej, wysokowydajnej i taniej metody HPTLC z wykorzystaniem detekcji densytometrycznej, do identyfikacji i ilościowego oznaczania dwóch glikozydów stewiolowych. Metoda została pomyślnie zwalidowana, potwierdzono jej selektywność, precyzję oraz dokładność. Wyznaczono zakres metody, granicę wykrywalności oraz oznaczalności. Stwierdzono krzywoliniowość wskazań w zakresie metody.Opracowanie nowej fazy rozwijającej pozwoliło na optymalizację warunków metody i osiągnięcie korzystniejszych wartości współczynnika opóźnienia Rf. Metoda odznacza się również prostym, jednoetapowym procesem ekstrakcji badanych związków oraz umożliwia detekcję w zakresie UV, dzięki czemu nie ma konieczności wybarwiania otrzymanych chromatogramów. Analiza została przeprowadzona w sposób bezpośredni. Nie stwierdzono występowania interferencji ze składnikami współobecnymi.W przebiegu analizy zidentyfikowano i ilościowo oznaczono stewiozyd i rebaudiozyd A w słodzikach, co stanowi pierwsze jak do tej pory badanie w tego rodzaju materiale. Badane słodziki różniły się stopniem oczyszczenia, składem substancji pomocniczych a co najważniejsze zawartością składników głównych, czyli stewiozydu i rebaudiozydu A. Ilość rebaudiozydu A okazała się być większa niż stewiozydu. Również przeprowadzone badanie czasu rozpadu tabletek poszczególnych słodzików, ukazujące różną szybkość rozpuszczania, pozwoliło na stwierdzenie ich odmiennych właściwości.Podsumowując, opracowana metoda okazała się być przydatna w przeprowadzonym oznaczeniu i może być wykorzystana w rutynowych analizach glikozydów stewiolowych. Jest to szczególnie ważne ze względu na fakt, iż Stevia rebaudiana (Bertoni) jest w coraz powszechniejszym użyciu.

The final results of this study was development of a new, simple, rapid, high throughput and cheap high performance thin layer chromatographic technique with densitometric detection for identification and quantification of two steviol glycosides. Analitycal procedure presented in this thesis has been successfully validated. The selectivity, precision and accuracy was confirmed. There has been established the range of the method, detection limit and limit of quantitation. A curvilinear relationship was found in this method.Development of a new mobile phase enable optimization of method conditions and to achieve a better value of retention factor Rf. The method was characterized by simple, one-step extraction process and detection in UV range. The assays has not been interfere with any other substances that occurred in analyzed samples. Direct analysis was performed without the need of derivatization.It was the first time identification and quantitative determination of stevioside and rebaudioside A in sweeteners. Researches revealed differences in purification, composition of excipients and the contents of the main active components: stevioside and rebaudioside A in 5 sweeteners. The amount of rebaudioside A was proved to be greater than stevioside. Various properties of tablets was also demonstrate based on different disintegration time.In conclusion, a new method was found to be reliable in this examination and could be used for the routine analysis of steviol glycoside. This is especially important becauce of the fact that Stevia rebaudiana (Bertoni) is in increasingly common use.