Influence of ADAM10 inhibition on adhesion of plasma cells to endothelial cells

Białka należące do rodziny ADAM (ang. a disintegrin and metaloprotease), ze względu na swoją budowę, mogą brać udział w sygnalizacji oraz adhezji komórkowej. Ich domena metaloproteinazowa odpowiada za proteolityczne uwalnianie zewnątrzkomórkowej domeny innych białek błonowych, proces ten zwany jest złuszczaniem lub ścinaniem (ang. shedding). Funkcją domeny dezintegrynowej jest łączenie się z integrynami [1]. ADAM10 jest zaangażowany w wiele procesów układu odpornościowego. Na przykład, dzięki uczestnictwu w przyczepianiu się leukocytów do śródbłonka, złuszczaniu fraktalkiny oraz receptora CD44 [2] [3]. Poprzez ścinanie zewnątrzkomórkowej części CD23, a tym samym pobudzanie produkcji IgE, bierze również udział w modulacji odpowiedzi alergicznej [4]. W ostatnich latach białko ADAM10 zostało zidentyfikowane jako czynnik niezbędny do rozwoju limfocytów B strefy brzeżnej śledziony [5]. Pomimo tego, iż ADAM10 jest bardzo dobrze opisaną metaloproteinazą, nie zbadano jeszcze jego roli w komórkach plazmatycznych. W niniejszej pracy zanalizowano, przy wykorzystaniu techniki siRNA oraz dwóch modeli adhezji komórkowej, rolę jaką pełni ta metaloproteaza podczas adhezji plazmocytów do komórek śródbłonka. Udało się otrzymać trzy linie komórkowe ze ~100% wyciszeniem białka ADAM10 oraz przeprowadzić adhezję zarówno w warunkach statycznych jak i w przepływie. Wykazano, że wyciszenie białka ADAM10 w komórkach plazmatycznych zmniejsza liczbę komórek przyczepionych do komórek endotelialnych pochodzących z mysich obwodowych węzłów chłonnych i kępek Peyera. Doświadczenia przeprowadzono w warunkach adhezji statycznej oraz, w celu potwierdzenia wyników, w przepływie, który naśladuje warunki fizjologiczne. Podsumowując, obydwa modele pokazały, że komórki z ekspresją ADAM10 lepiej przyczepiają się do komórek śródbłonka niż komórki z niedoborem tego białka.

ADAMs represent a multi-functional family of proteins which name reflects the key structural domains. The best characterized function of metalloproteinase domain is a proteolitic release of an ectodomain of a membrane protein, known as an ectodomain shedding. The disintegrin domain is responsible for cell-cell interactions [1]. ADAM10 plays an important role in immune system, for example by cleavage of fractalkine or CD44 (which allows leukocytes adhesion to endothelial cells) [2], [3]. It can also participate in allergic response by shedding membrane bound CD23 hence enhancing production of IgE [4]. Moreover, ADAM10 is essential for B cell development into marginal zone B cells in the spleen [5]. Although ADAM10 is a well characterized protein, no studies have yet comprehensively examined the role it plays in plasma cells. In this study, we used RNA interference approach and two models of adhesion assays to analyze the importance of ADAM10 in plasma cells. We have established three cell lines with ~100% of ADAM10 silencing, and performed static and flow adhesion experiments. We found that silencing of ADAM10 protein in plasma cells reduces the ability of these cells to attach to endothelial cells derived from murine peripheral lymph nodes and Peyer’s patches under static conditions and under shear flow. Both models proved that cells expressing ADAM10 demonstrated greater adhesiveness than silenced cells. However, the full spectrum of possible ADAM10 participation in plasma cells adhesion has yet to be defined.