Development and validation of method for determination of selected drugs used to treat arterial hypertension using LC/MS/MS.

Celem pracy było opracowanie i walidacja metody jednoczesnego oznaczania wybranych leków stosowanych w leczeniu nadciśnienia tętniczego (amiodaron, bisoprolol, digoksyna, eplerenon, furosemid, iwabradyna, karwedilol, lisinopril, metoprolol, nebiwolol, perindopril, ramipril, spironolakton, torasemid, zofenopril) w osoczu ludzkim. Oznaczenia prowadzono z zastosowaniem wysokosprawnej chromatografii cieczowej sprzężonej z tandemową spektrometrią mas z jonizacją typu elektrorozpylania (LC-ESI/MS/MS) po uprzednim przygotowaniu próbek osocza przez strącenie lub ekstrakcję. Opracowana metoda spełnia kryteria walidacji opracowane przez FDA i EMA dla metod bioanalitycznych. Opracowana metoda cechowała się wysoką czułością, umożliwiając oznaczenia wybranych leków w osoczu ludzkim. Precyzja metody dla badanych związków była niższa od 15%, a dokładność mieściła się w granicach 85 115%. Dla badanych leków uzyskano liniowość w szerokim zakresie stężeń, a współczynnik korelacji był wyższy od 0.99.Opracowaną metodę zastosowano do oznaczenia stężenia badanych leków w ramach terapii pod kontrolą stężenia leku we krwi. W osoczu pobranym od sześciu chorych, u których zdiagnozowano oporne nadciśnienie tętnicze zidentyfikowano oraz oznaczono stężenie trzech leków, takich jak amiodaron, furosemid i ramipril.

The aim of this study was to develop and validate simultaneous quantitative and qualitative determination of fifteen drugs in human plasama used to treat hypertension (amiodarone, bisoprolol, digoxin, eplerenone, furosemide, ivabradine, carvedilol, lisinopril, metoprolol, nebivolol, perindopril, ramipril, spironolactone, torasemide, zofenopril). At the beginning plasma samples were precipitated or extracted. Afterwards analysis was performed using high performance liquid chromatography with tandem mass spectroscopy combined with electrospray ionization (LC-ESI/MS/MS). The developed method corresponds to the validation criteria of bioanalytical methods made by FDA and EMA. Performed method was characterized by high sensitivity, enabling the determination of selected drugs in human plasma. The precision of the method for the tested compounds was lower than 15 % and the accuracy was within 85-115 %. For all drugs the linearity in wide range of concentration was obtained and the coefficient of correlation was higher than 0.99. The developed method was used to determine the concentration of drugs tested in the context of therapeutic drug monitoring. In a plasma collected from six patients diagnosed with resistant hypertension were identified and determined concentration of the three drugs such as amiodarone, furosemide and ramipril.