Application of chemiluminescence for investigating the effects of selected antibodies on platelet activity

Poważnym problemem w praktyce klinicznej jest oporność na transfuzje koncentratów krwinek płytkowych (KKP). Oporność ta może być m. in. wynikiem wytworzenia przez pacjenta przeciwciał skierowanych do antygenów zgodności tkankowej (human leukocyte antygen – HLA) obecnych na płytkach krwi. Celem pracy była próba zastosowania chemiluminescencji wzbudzanej ultradźwiękami o wysokiej częstotliwości do badania oddziaływań płytek krwi z wybranymi przeciwciałami, tj. przeciwciałami naturalny anty-A i anty-B oraz przeciwciałami anty-HLA. W pracy wykorzystano KKP otrzymywane metodą aferezy lub zlewane z kożuszków leukocytarno-płytkowych. Badane surowice zawierające przeciwciała naturalne anty-A i anty-B pochodziły od zdrowych dawców krwi. Surowice zawierające przeciwciała anty-HLA pochodziły od pacjentów zimmunizowanych do antygenów układu HLA. Do wzbudzania płytek wykorzystano fale ultradźwiękowe o częstotliwości 1 MHz. Wielkość wzbudzenia mierzono poprzez pomiar chemiluminescencji luminolu. W pracy wykazano, że przeciwciała anty-HLA wiążąc się z płytkami krwi powodują nieznaczny, trudno mierzalny wzrost chemiluminescencji. Ultradźwięki o wysokiej częstotliwości powodują dodatkową aktywację płytek związaną z powstawaniem reaktywnych form tlenu, co wiąże się z wysokim sygnałem chemiluminescencji luminolu. Aktywacji towarzyszy agregacja płytek mająca odzwierciedlenie w histogramie rozkładu wielkości płytek. Wzorce aktywacji określonego preparatu płytkowego dla serii różnych przeciwciał anty-HLA są zróżnicowane i zależą od repertuaru antygenów obecnych na powierzchni płytek.Opracowana metoda potencjalnie może służyć do wykonywania testu zgodności antygenowej płytek krwi dla pacjentów posiadających przeciwciała reagujące z antygenami płytkowymi.

Platelet transfusion refractoriness (PTR) represents a significant clinical challenge. One of the key immunological mechanisms underlying PTR is the development of alloantibodies directed against human leukocyte antigens (HLA) expressed on the surface of donor platelets.The objective of this study was to explore the applicability of luminol-based chemiluminescence, triggered by high-frequency ultrasound, as a method for evaluating interactions between platelets and selected antibodies- specifically, naturally occurring anti-A and anti-B isoagglutinins, as well as anti-HLA antibodies.The study utilized platelet concentrates (PCs) obtained either by apheresis or pooled from buffy coats. The sera containing natural anti-A and anti-B antibodies were collected from healthy blood donors. Anti-HLA antibody-containing sera were derived from alloimmunized patients sensitized to HLA antigens. Platelet activation was induced using ultrasound waves at a frequency of 1 MHz, and the extent of activation was quantified through chemiluminescence measurements.The findings demonstrated that binding of anti-HLA antibodies to platelets elicited only a minimal increase in chemiluminescent signal. However, high-frequency ultrasound significantly enhanced platelet activation, likely due to the generation of reactive oxygen species, which corresponded with a marked increase in luminol chemiluminescence. This activation was accompanied by platelet aggregation, as evidenced by shifts in platelet size distribution.Distinct activation profiles were observed for different PCs exposed to various anti-HLA sera, reflecting heterogeneity in surface antigen expression.The developed method has potential utility as a functional assay for HLA compatibility testing in patients with anti-HLA antibodies, offering a possible tool for improving the efficacy of platelet transfusion in alloimmunized individuals.