Analysis of levels of selected proteins of the Hippo pathway in human neuroblastoma cell lines treated with BIO1211 and SB273005 inhibitors of integrin complexes

Neuroblastoma to jeden z najbardziej śmiertelnych nowotworów dziecięcych, dlatego tak ważne jest znalezienie nowych, efektywnych metod terapii tego nowotworu. Połączenie komórki z białkami macierzy zewnątrzkomórkowej, za pośrednictwem kompleksów integryn, warunkuje ich przeżycie. Brak tego oddziaływania wywołuje apoptozę komórek. Postanowiono zastosować inhibitory kompleksów integryn: SB273005 ( hamującego kompleksy αVβ3/αVβ5) oraz BIO1211 ( hamującego kompleks α4β1) w celu sprawdzenia ich wpływu na aktywność szlaku Hippo. Szlak Hippo reguluje wielkość organów oraz warunkuje przeżycie komórki. W przypadku zwiększonej aktywności tego szlaku komórka umiera. Badania przeprowadzono na czterech liniach komórkowych neuroblastoma: Kelly, SK-N-SH, LA-N-5 oraz IMR-32. W przypadku komórek Kelly, SK-N-SH i LA-N-5 zastosowano inhibitor SB273005 natomiast komórki IMR-32 były traktowane inhibitorem BIO1211. Za pomocą metody western blot zbadano poziom wybranych białek szlaku Hippo: YAP, MOB fosforylowanego YAP w pozycji Ser397 oraz fosforylowanego MOB w pozycji Thr35. Wykonane doświadczenie poszerzyło wiedzę o biologii komórek neuroblastoma.

Neuroblastoma is one of the most fatal childhood cancers. That is why finding new effective therapy method for this type of cancer is so important. Interaction with the extracellular matrix through integrin complexes is vital for cell survival. Losing this interaction results in cell death through apoptosis. Integrin complexes inhibitors SB273005 (the inhibitor of the αVβ3/αVβ5 complexes) and BIO1211 (the inhibitor of the α4β1 complexes) were chosen to investigate the influence of the lack of cell interaction with the extracellular matrix on Hippo pathway.The Hippo pathway regulates growth of organs and survival of cells. With elevated activity of this pathway cells die. Research was conducted on four neuroblastoma cell lines: Kelly, SK-N-SH, LA-N-5 and IMR-32. SB273005 inhibitor was used on Kelly, SK-N-SH, LA-N-5. Bio1211 was used on IMR-32. Levels of the chosen Hippo pathway proteins were investigated by the western blot method. Chosen proteins were: YAP, MOB phosphorylated YAP in position Ser397 and phosphorylated MOB in position Thr35. The performed experiment broadened knowledge on neuroblastoma biology.