Effect of a mixture of persistent environmental pollutants on the viability of human ovarian granulosa cells - HGrC1 line

Żywotność komórek ziarnistych, będących głównym komponentem pęcherzyków jajnikowych, to jeden z kluczowych parametrów zdrowia reprodukcyjnego kobiet. Na funkcjonowanie tych komórek mogą wpływać trwałe zanieczyszczenia organiczne, których obecność potwierdzono w płynie pęcherzykowym kobiet. Związki te oddziałując na takie procesy jak proliferacja i apoptoza, mogą mieć kluczowe znaczenie w rozwoju ziarniszczaka jajnika- jednego z najgroźniejszych nowotworów ginekologicznych. Celem pracy było określenie wpływu trwałych zanieczyszczeń organicznych środowiska na żywotność komórek ziarnistych. Badania przeprowadzono na linii komórkowej ludzkich komórek ziarnistych jajnika- HGrC1, które traktowano wybranymi trwałymi zanieczyszczeniami organicznymi (PFOA, PFOS, p,p’-DDE, HCB, PCB153) oraz ich mieszaninami. Wpływ badanych związków na apoptozę komórek ziarnistych określono za pomocą fluorymetrycznego pomiaru aktywności kaspazy-3 oraz oceny ekspresji genu kaspazy-3, z kolei wpływ na proliferację oceniono przy użyciu testu AlamarBlue. Badania wskazują, że wybrane trwałe zanieczyszczenia organiczne oraz ich mieszaniny, nie wpływają na proliferację komórek ziarnistych oraz aktywność kaspazy3. Wykazano natomiast zmianę ekspresji genu kaspazy-3 po 24h narażenia na mieszaninę związków, w stężeniu dziesięciokrotnie niższym od wykrytego w płynie pęcherzykowym. Wnioskujemy zatem, że długotrwałe narażenie na badane związki może skutkować zaburzeniem stosunku proliferacja/apoptoza w komórkach ziarnistych, co może być jedną z przyczyn prowadzących do zaburzeń w płodności.

The viability of granulosa cells, the main component of ovarian follicles, is one of the key parameters of women's reproductive health. The function of these cells may be affected by persistent organic pollutants that have been confirmed in the follicular fluid of women. By affecting processes such as proliferation and apoptosis, these compounds may be crucial in the development of ovarian granulosa cell tumors - one of the most dangerous gynecological tumors. The aim of this study was to determine the effect of persistent environmental organic pollutants on granulosa cell viability. The study was performed on human ovarian granulosa cell line-HGrC1, which was treated with selected persistent organic pollutants (PFOA, PFOS, p,p'-DDE, HCB, PCB153) and their mixtures. The effect of the tested compounds on apoptosis of granulosa cells was determined by fluorometric measurement of caspase-3 activity and assessment of caspase-3 gene expression, whereas the effect on proliferation was evaluated using the AlamarBlue assay. Studies indicate that selected persistent organic pollutants and their mixtures, do not affect granulosa cell proliferation and caspase-3 activity. In contrast, the expression of the caspase-3 gene was altered after 24h of exposure to the mixture of compounds, at a concentration ten times lower than that detected in the follicular fluid. Thus, we conclude that long-term exposure to the tested compounds may result in a disruption of the proliferation/apoptosis ratio in granulosa cells, which may be one of the causes leading to fertility disorders