Eicosanoids as inflammatory mediators in the in vitro model

Eikozanoidy są jednymi z kluczowych mediatorów reakcji zapalnych. Dotychczas opisywano prozapalny charakter tych związków, jednak w świetle ostatnich badań naukowych, pojawia się coraz więcej informacji na temat przeciwzapalnego działania pochodnych kwasów tłuszczowych. Celem niniejszej pracy było określenie pro- lub przeciwzapalnego wpływu nienasyconych kwasów tłuszczowych n-3 i n-6, będących prekursorami eikozanoidów, na komórki. Doświadczenia prowadzono na ludzkich komórkach A549 oraz HUVEC z wykorzystaniem m.in metod immunodetekcji i chromatografii gazowej. Próbki inkubowano przez 24 godziny z kwasami arachidonowym (AA) lub eikozapentaenowym (EPA), a następnie część komórek aktywowano za pomocą LPS. Nie zaobserwowano zwiększenia stopnia apoptozy lub zmniejszenia przeżywalności komórek po inkubacji z kwasami tłuszczowymi. Stwierdzono wyraźne różnice w zawartości procentowej kwasów tłuszczowych między dwoma typami komórek. Wykazano także odmienną zdolność do syntezy izoprostanów w badanych komórkach. Próbki poddano analizie western blot, po której obserwowano zwiększoną względną intensywność chemiluminescencji COX-2, co przekłada się na zwiększoną aktywność enzymu w komórkach inkubowanych z AA i aktywowanych LPS. Równocześnie komórki HUVEC inkubowane z EPA wykazywały niższą aktywność COX-2 w porównaniu do kontroli. Uzyskano wyniki świadczące o prozapalnych właściwościach AA i przeciwzapalnym charakterze EPA. Praca poszerzyła wiedzę dotyczącą kwasów tłuszczowych n-3 jako związków o działaniu przeciwzapalnym, co może być pomocne w trakcie szukania nowych strategii do walki ze stanem zapalnym.

Eicosanoids are one of the most crucial inflammation mediators. Their proinflammatory properties were are well known, however, nowadays the studies about anti-inflammatory effect of fatty acids deratives are also performed. The aim of this study was to evaluate pro- or anti-inflammatory impact of polyunsaturated fatty acids n-3 and n-6 as eicosanoids precursors, on healthy cells. To evaluate the effect two different human cell lines were used - HUVEC and A549. Also a wide range of metods like gas chromatography and immunodetection were used in this study. Samples were treated with arachidonic (AA) or eicosapentaenoic acid (EPA) and then incubated for 24 hours. In the next step LPS was added to some cells in order to stimulate them. After incubation with fatty acids no evaluated levels of apoptosis or decreased levels of viability were observed. Significant differences in the amount of fatty acids between the two types of cells were observed. Different ability to synthesize isoP was observed in the experimental cells. The western blot analysis were performed on properly prepared samples in order to determinate the activity of COX-2. The elevated activity of this enzyme was observed in cells treated with AA and activated with LPS. Moreover, compared to control, cells incubated with EPA showed decreased activity of COX-2. The results of the study have revealed the pro-inflammatory properties of AA, while the EPA had the opposite, anti-inflammatory effect. This study provide information about n-3 fatty acids as anti-infammatory substances, which can be used in the process of developing new anti-inflammatory drugs.