Effect of anticoagulant on the determination of fatty acids in red blood cells.

Przeprowadzono opracowanie oraz walidację procedury analitycznej oznaczania kwasów tłuszczowych w erytrocytach krwi człowieka. Skupiono się na kwasach wielonienasyconych, szczególnie kwasach Ω-3 i Ω-6.Analiza kwasów tłuszczowych została przeprowadzona za pomocą chromatografii gazowej z detektorem płomieniowo-jonizacyjnym. Kwasy tłuszczowe nie są lotne, dlatego niezbędna była ich wcześniejsza derywatyzacja. W tym przypadku była to estryfikacja. Dla 9 wzorców przeprowadzono analizę jakościową:•Kwas arachidonowy (AA)•Kwas dokozaheksaenowy (DHA)•Kwas elaidynowy (ELA)•Kwas erukowy (ERA)•Kwas linolowy (LA)•Kwas α-linolenowy (ALA)•Kwas oleinowy (OA)•Kwas oleopalmitynowy (PA)•Kwas petroselinowy (PSA)Na chromatogramach otrzymano siedem z tych kwasów,gdzie trzy z nich to izomery i nie można ich rozróżnić. Stwierdzono, że czas retencji jest proporcjonalny do masy molowej oraz liczby wiązań. Przeprowadzono walidację metody analitycznej. Dla 5 wzorców (AA, OA, LA, ALA, PA) sporządzono roztwory wzorcowe na poziomie 25, 50, 100, 150 i 200 µg/ml. Wyznaczono zależność liniową dla wzorców oraz precyzję dla dwóch poziomów stężeń (100 i 200µg/ml). Współczynnik zmienności z trzech pomiarów wynosił od 3,4% do 10,1% dla różnych kwasów.W próbkach erytrocytów oznaczono jedynie stężenie kwasu linolowego oraz arachidonowego. Ich stężenie różniło się w zależności od tego jaki dodano antykoagulant.Przeprowadzono również doświadczenie mające na celu wyznaczenie wydajności ekstrakcji kwasów tłuszczowych z materiału biologicznego. Wydajność ekstrakcji wahała się na poziomie 50-70%.

In the thesis a method for analyzing of fatty acids in human blood red cells is presented. The focus is on polyunsaturated acids, especially acids, Ω-3 and Ω-6.Fatty acid analysis was performed by gas chromatography with flame ionization detector. They are not volatile, so they needed derivatization. In this case it was the esterification. Nine standards solution were analyzed:•Arachidonic acid (AA)•Docosahexaenoic acid (DHA)•Elaidic acid (ELA)•Erucic acid (ERA)•Linoleic acid (LA)•α-linolenic acid (ALA)•Oleic acid (OA)•Palmitoleic acid (PA)•Petroselinic acid (PSA)The chromatograms obtained seven of these acids, where the three of them are isomers and can not be distinguished. It was found that the retention time is proportional to molecular weight and the number of bonds.For the five standard solutions (AA, OA, LA, ALA, PA) prepared stock solutions of 25, 50, 100, 150 and 200 ug / ml. The dependence of the linear models and the precision for two concentration levels (100 and 200μg/ml). The coefficient of variation of three measurements ranged from 3.4% to 10.1% for the different acids.In red blood cells were determined only linoleic and arachidonic acid. Their concentrations differed depending on which anticoagulant was added. The highest concentrations were obtained in samples of heparin, whereas in the blood with the addition of citrate and EDTA concentrations were at similar levels.Experience was also conducted to determine the extraction efficiency of fatty acids from biological material. During preparation of blood samples, it was added small amount of fatty acids mixture for them. Concentration of these mixture was 150µg/ml. Extraction efficiency ranged from 50-70% level.