Reporter system for Human Coronavirus NL63

Wraz z rozwojem technik biologii molekularnej oraz hodowli komórkowej dostępne stają się coraz doskonalsze narzędzia do wykrywania, identyfikacji oraz ilościowego oznaczania zakażeń wirusowych. Do takich narzędzi należą systemy reporterowe wykorzystujące do detekcji reporter pozwalający na łatwą identyfikację fragmentów kwasów nukleinowych, białek lub procesów biochemicznych charakterystycznych dla danego patogenu. Zastosowanie systemów reporterowych ma na celu uproszczenie, skrócenie a tym samym obniżenie kosztów wykrywania patogenów.Ludzki koronawirus NL63 został odkryty stosunkowo niedawno i jest odpowiedzialny za duży odsetek przeziębień. Szczególnie ciężkie objawy przy zakażeniu występują u dzieci, osób starszych oraz osób z obniżoną odpornością, jednak objawy chorobowe stwierdza się również u dorosłych. Niektóre z zakażeń mają na tyle poważny przebieg, że wymagają hospitalizacji pacjenta, jak również zgłaszano przypadki śmiertelne związane z zakażeniem wirusem. Mimo intensywnych badań nad tym patogenem, mechanizm zakażenia nie został do końca zbadany. W niniejszej pracy przedstawiono badania mające na celu opracowanie systemu reporterowego dla infekcji ludzkim koronawirusem NL63. Podstawą działania proponowanego systemu reporterowego jest zastosowanie konstruktu genetycznego zawierającego gen reporterowy, który koduje mRNA ulegające translacji jedynie w przypadku obecności w komórce RNA-zależnej polimerazy RNA, kodowanej w genomie ludzkiego koronawirusa NL63.

Along with development of molecular biology methods and cell culture techniques new tools for detection, identification and quantitative analysis of viral infections become available. These include reporter systems, which utilize pathogen specific markers such as genetic sequence or biochemical processes. Presence of such a marker in combination with effector molecule emitting an easy to quantify signal allows simplified detection of the pathogen and thus reduce cost of such an operation.Human coronavirus NL63 is associated with a significant number of common cold cases. Children and immunodeficient persons are most susceptible to HCoV-NL63 infections. In majority of cases infection with this virus is relatively mild, though severe cases requiring hospitalization are also common and fatal outcome has been reported. Despite its high prevalence and undoubtful association with clinical illness the mechanisms of infection have not yet been fully understood.In this work an attempt was made to create the reporter system for HCoV-NL63 infection. The system is based on susceptible cell line stably transfected with reporter genetic construct which can be translated only in presence of viral RNAdependent RNA polymerase.