Application of fluorescence in situ hybridization for the identification of bacteria in rat spleen

Celem pracy licencjackiej była identyfikacja drobnoustrojów w homogenatach tkanek szczurów stresowanych oraz niestresowanych. Szczury stresowane podzielono na dwie grupy: wykazujące objawy zestresowania oraz bez objawów stresu. Do oznaczenia różnorodności bakterii wykorzystano metodę hodowlaną oraz fluorescencyjną hybrydyzację in situ, w skrócie FISH. Bakterie hodowano na 3 podłożach: Schaedler, Columbia oraz na agarze z żółcią, eskuliną i azydkiem. W metodzie FISH zastosowano sondy komplementarne do 16S rRNA, które pozwoliły na uwidocznienie całych bakterii. Obie metody wykazały, że większa liczba bakterii występuje u szczurów z objawami zestresowania. Natomiast u szczurów niestresowanych nie zaobserwowano ich obecności. Fluorescencyjna hybrydyzacja in situ stanowi dobrą alternatywę dla metody hodowlanej, ponieważ umożliwia identyfikacje bakterii, których nie można wyhodować w warunkach laboratoryjnych.

The purpose of this bachelor thesis was the identification of bacteria in the spleen homogenate of stressed and non-stressed rats. Stressed rats were divided into two groups: rats showing stress symptoms and rats with no stress signs. Culture plates and fluorescence in situ hybridization were used to show the diversity of bacteria. Microorganisms were cultivated on the three types of agar growth medium: Schaedler, Columbia and bile esculine azid agar. Probes used in FISH were complementary to 16S rRNA, which allowed to see the whole bacteria structure. Whereas there were no bacteria found in the non-stressed rats. Fluorescence in situ hybridization is a valid alternative method to identify nonculturable bacteria.