Development of a purification procedure for commercially available nisin preparation

Celem niniejszej pracy było opracowanie metody doczyszczania komercyjnie dostępnego preparatu nizyny. Nizyna jest wzorcowym peptydem, używanym jako odnośnik w badaniach dotyczących aktywności biologicznej innych bakteriocyn, jednak handlowo dostępne preparaty nie mają na tyle wysokiej czystości, aby można je było stosować w takich badaniach. W celu oczyszczenia nizyny peptyd wyekstrahowano z wyjściowego preparatu, a następnie zastosowano technikę RP-HPLC, przeprowadzając kolejno dwa rozdziały preparatywne. Pomiar techniką spektrometrii mas potwierdził tożsamość peptydu, natomiast rozdział analityczny PR-HPLC oraz rozdział elektroforetyczny SDS-PAGE umożliwiły weryfikację stopnia czystości. Wykonano również analizę składu aminokwasowego w celu oznaczenia stężenia oczyszczonego peptydu, a także przeprowadzono oznaczenie zawartości endotoksyny. Otrzymano homogenny preparat, w którym zawartość endotoksyny mieści się w zakresie umożliwiającym wykorzystanie preparatu do badań nad komórkami eukariotycznymi.

The aim of this paper was to develop a purification procedure for commercially available nisin preparation. Nisin is a standard peptide often used as a reference in the studies on biological activities of other bacteriocins. However, the purity of commercially available nisin preparations does not meet the standards required for such an application. In order to purify nisin, the peptide was extracted from the commercial preparation and two preparative RP-HPCL separations were carried out. The identity of the peptide was confirmed using mass spectrometry. An analytical RP-HPLC separation and SDS-PAGE electrophoresis confirmed the purity of the obtained product. The concentration of the purified peptide was determined by amino acid analysis and, additionally, the endotoxin level was measured. The obtained product was homogenous and the endotoxin content was low enough for utilization in experiments involving eukaryotic cells.