Investigations of the influence of external factors on the process of formation of protein-ligand complexes in the crystalline phase

Wyprodukowano i oczyszczono warianty rekombinowanej laktoglobuliny posiadające substytucje: I56F-L39A-M107F (FA/56F), I56F-L39A-M107W (FA/56W), F105L-L39A-M107W (LA/107W), F105L-L39A-I56W (LA/56W). Zbadano, jak siła jonowa, pH oraz stężenie liganda wpływa na proces tworzenia kompleksu białko-ligand w fazie krystalicznej. Otrzymano kryształy o różnej morfologii – przypominające „romby”, „prostokąty” oraz w formie igieł. Kryształy wariantów FA/56F oraz FA/56W wysłano na synchrotron BESSY II (Berlin) w celu wykonania pomiarów dyfraktometrycznych. Potwierdzono wcześniejsze obserwacje dotyczące zależności między stosunkiem molowym białko/ligand, a morfologią kryształów i ich strukturą krystaliczną. Dodatkowo po raz pierwszy zebrano dane o rozdzielczości 1.24 Å, jest to najwyższa rozdzielczość z jaką kiedykolwiek wyznaczono strukturę kompleksu laktoglobulina-ligand.

Variants of recombinant lactoglobulin possessing substitutions: I56F-L39A-M107F (FA/56F), I56F-L39A-M107W (FA/56W), F105L-L39A-M107W (LA/107W), F105L-L39A-I56W (LA/56W) were produced and purified. It was tested how ionic strength, pH and ligand concentration affect the process of forming a protein-ligand complex in the crystalline phase. Crystals of various morphology were obtained - resembling "rhombi", "rectangles" and in the form of needles. Crystals of variants FA/56F and FA/56W were sent to the BESSY II synchrotron (Berlin) to collect X-ray diffraction data. Previous observations regarding the relationship between protein / ligand molar ratio and crystal morphology and their crystal structure were confirmed. In addition, for the first time data with a resolution of 1.24 Å was collected, this is the highest resolution at which the structure of the lactoglobulin-ligand complex has ever been determined.