Optimisation of Human Bronchial Fibroblasts cell culturing conditions for the coculture of fibroblasts and epithelial cells in the EMTU model

Hodowle komórkowe są jedną z najczęściej wykorzystywanych metod w badaniach naukowych. Mogą być one prowadzone na wiele różnych sposobów. Podstawowym typem jest hodowla w układzie 2D, a jej największą zaletą jest niski koszt i łatwość prowadzenia. Można również wykorzystywać inne układy, które zapewniają bardziej fizjologiczne środowisko. Przykładami mogą być hodowle 3D czy kokultury komórkowe. Obiecującym modelem do badań nad astmą jest model EMTU, w którym prowadzi się kokulturę fibroblastów z nabłonkami hodowanymi na insertach. Celem pracy było zbadanie wpływu wybranych pożywek hodowlanych dedykowanych nabłonkom na ludzkie fibroblasty oskrzelowe, w celu optymalizacji warunków hodowli ludzkich fibroblastów oskrzelowych i nabłonków w modelu EMTU.Otrzymane wyniki świadczą o tym, że pożywki dedykowane nabłonkom nie wpływają znacząco na żywotność ludzkich fibroblastów oskrzelowych. Wpływają natomiast na zwiększenie proliferacji komórek.Sprawdzono również wpływ danych pożywek na zachodzenie indukowanego TGF procesu FMT. Pełna pożywka dedykowana nabłonkom (pożywka BEGM) obniża liczbę komórek, które przeszły proces FMT, w przeciwieństwie do pożywki standardowej dla fibroblastów z dodatkiem, lub bez, suplementów z pożywki BEGM, która dla podstawowego markera tego procesu, jakim jest a-SMA, stymuluje zachodzenie procesu FMT.

Cell cultures are one of the most common methods used in scientific research. They can be propagated using different methods. The basic type of animal cell culture is 2D culture. Main advantages of this model are low costs and the ease of propagation. To provide more physiological conditions for cells, other models, such as 3D or cocultures can be used. The EMTU model is a promising model to be used in research on asthma. In this model fibroblasts and epithelial cells are cultured together.The aim of this thesis was to test the effects of chosen media dedicated for epithelial cells on human bronchial fibroblasts in order to optimize the cell culturing conditions of the coculture of fibroblasts and epithelial cells in the EMTU model.Obtained results show that the media dedicated for epithelium do not have a significant effect on the viability of the Human Bronchial Fibroblasts, but they increase the proliferation rate of those cells.The influence of chosen media on TGF-induced FMT was evaluated by immunofluorescent staining of -SMA- the most common marker of FMT. Full BEGM medium – the epithelium dedicated medium– has been shown to lower the FMT efficiency in HBF populations in contrast to standard DMEM medium with or without BEGM supplements.