The use of immobilized enzymes for the screening tests of lipases inhibitors

Celem pracy było przebadanie wybranych związków otrzymanych w Katedrze Chemii Organicznej CMUJ jako potencjalnych inhibitorów lipaz z wykorzystaniem metody opracowanej w pracy magisterskiej Pani Dagmary Pociechy pt. „ Zastosowanie immobilizowanych lipaz jako narzędzi do poszukiwania ich inhibitorów”. W badaniach testowaną lipazą była Pseudomonas cepacia oraz inhibitor lipaz – orlistat. Jako chromogeniczny substrat (S) w przeprowadzonych reakcjach enzymatycznych stosowano otrzymany w Katedrze Chemii Organicznej heptanian p-nitrofenolu.W prowadzonych reakcjach enzymatycznych ilość uwalnianego para-nitrofenolu (pNP) oraz substratu (S) była monitorowana przy użyciu HPLC z detektorem UV. Zmiany aktywności enzymatycznej były wyznaczane na podstawie reakcji prowadzonej dla lipazy Pseudomonas cepacia. Inhibicję badanych związków porównywano z inhibicją orlistatu, w przeprowadzonych badaniach najsilniejszą inhibicję wykazał związek JSA 6,7 (liczony względem chromogenicznego substratu (S)). Inhibicja badanych związków obliczona na produkt (pNP) jest niejednoznaczna, co mogło być spowodowane błędem wynikającym z modyfikacji metody opracowanej przez Panią Dagmarę Pociechę.

The purpose of the thesis was examination of selected compounds obtained at the Department of Organic Chemistry CMUJ as potential lipases inhibitors by the application of a method developed by Mrs. Dagmara Pociecha in her Master’s thesis “Application of immobilized lipases as search tools for its inhibitors”. Pseudomonas cepacia was the tested lipase and orlistat was the lipase inhibitor. A compound p-nitrophenol heptanate obtained in the Department of Organic Chemistry was used as a chromogenic substrate (S).The amount of para-nitrophenol (pNP) and substrate (S), both released in enzymatic reactions was being monitored by the application of HPLC with a UV detector. Changes in enzymatic activity were determined on the basis of the reaction conducted for Pseudomonas cepacia lipase.Inhibition of the tested compounds was compared to orlistat inhibition, the strongest inhibition in the conducted studies showed JSA compound 6.7 (calculated in regard to the chromogenic substrate (S)). The inhibition of the tested compounds calculated on the product (pNP) is ambiguous, probably caused by an error resulting from the modification of the method developed by Mrs. Dagmara Pociecha.