Effect of MCPiP1 protein downregulation on the antimicrobial peptides expression in HaCaT cell line.

Peptydy antybakteryjne to jeden ze starszych ewolucyjnie mechanizmów odpornościowych, jakie obserwuje się w ludzkim ciele. Występują one powszechnie zarówno wśród roślin, jak i zwierząt. Jest to niejednorodna i niespokrewniona grupa białek, wyróżniana wyłącznie na podstawie wykazywanej aktywności antydrobnoustrojowej. Charakterystyczna dla tego typu reakcji immunologicznej jest szybka odpowiedź, pozwalająca wyprzedzać inne formy odporności. Reakcja oparta na AMP pojawia się w komórkach w odpowiedzi zarówno na czynniki stanu zapalnego (IL-1 β), jak i bezpośrednie sygnały obecności bakterii (LPS). Wśród AMP obserwuje się często działanie plejotropowe i pełnienie funkcji niezależnych od aktywności immunologicznej. W ramach prowadzonych badań analizowano zmiany poziomu ekspresji AMP wywołane wyciszeniem ekspresji regulatorowego białka MCPIP1 po zasymulowaniu komórek interleukiną 1- β. Jako modelu komórek skóry użyto linii HaCaT. Komórki transfekowano z użyciem lipofektaminy oraz siRNA dobranymi do celów wyciszenia ekspresji MCPIP1. Wyciszenie potwierdzono na poziomie białka za pomocą techniki Western Blot a także na poziomie mRNA za pomocą techniki PCR w czasie rzeczywistym, którą zastosowano także do pomiarów poziomu transkryptów peptydów antybakteryjnych. Otrzymane wyniki, zgodnie z przewidywaniami pozwoliły zaobserwować umiarkowany wzrost ekspresji peptydów antybakteryjnych w czasie indukowanego stanu zapalnego przy wyciszeniu ekspresji MCPIP1, poza okresem czasowym sześciu godzin. Najsilniejszą odpowiedź obserwowano zgodnie z przewidywaniami po upływie dwudziestu czterech godzin od stymulacji interleukiną 1- β.

Antimicrobial peptides are one of the older evolutionary mechanisms of resistance that we observe in the human body. They occur commonly among plants and animals. It is a heterogeneous and unrelated group of proteins, distinguished only on the basis of their antimicrobial activity. Characteristic for this type of immune reaction is the quick response, allowing overtake other forms of resistance. Action based on AMP occurs in cells in response to both inflammatory agents (IL-1 β), and a direct signal the presence of bacteria (LPS). Among AMP is often observed having a pleiotropic effect and acting as independent of immunological activity. In this study we analyzed changes in the level of expression of AMP-induced silencing the expression of regulatory proteins MCPIP1 the simulated cells with interleukin 1-β. As a model of skin cells it was used HaCaT cell line. Cells were transfected using lipofectamine and siRNA chosen for silencing expression of MCPIP1. Downregulation presence was confirmed at the protein level by Western Blot, as well as at the mRNA level by PCR technique in real time, which was also used for measuring the transcript levels of antimicrobial peptides. The results, as expected allowed to observe a moderate increase in the expression of antimicrobial peptides induced during inflammation while downregulated expression MCPIP1, outside the period of time six hours. The strongest response was observed as expected after twenty four hours after interleukin 1-β stimulation.