The influence of 2-Hf on PR immunolocalization in porcine granulosa cell cultures.

Progesterone plays a central role in the regulation of ovarian functions. The effects of progesterone on target tissues are mediated by progesterone receptors (PRs), which belong to a family of nuclear receptors and function as a ligand-activated transcription factors to regulate the expression of specific sets of target genes. Progesterone receptor is expressed in two isoforms, PGRA and PGRB, which have been shown to have different functional activities. The purpose of the present research was to test the role of the androgen receptor agonist (testosterone) or an antagonist (2-hydroxyflutamide) or both on PGRA expression in cultured porcine granulosa cells or whole follicles. Granulosa cells isolated from mature pig follicles were cultured for 24 hours in the presence of testosterone (T), 2-hydroxyflutamide (2-Hf) or both testosterone and 2-hydroxyflutamide (T+2-Hf). To better imitate in vivo conditions, isolated whole porcine follicles (6-8 mm in diameter) were cultured for 24 hours between two phases, with the addition of the same factors. All cultures were terminated and thereafter cells or sections obtained from cultured follicles were processed for PGRA immunocyto- or immunohistochemical staining. Moreover, expression of PGRA protein was determined by Western blot analysis. It was shown that the addition of 2-Hf in the presence of T had a positive effect on PGRA protein expression in porcine granulosa cells and ovarian follicles. The addition of 2-Hf to the media had some influence on PGRA distribution in cultured granulosa cells. It changed its localization from nuclear to perinuclear.Concluding, our results suggest that androgens could be involved in the control of PGRA expression in porcine ovaries in vitro and in vivo.

Progesteron odgrywa jedną z kluczowych ról w regulacji funkcji jajnika. W tkankach docelowych sygnał progesteronu jest przekazywany przez receptory progesteronowe (PRs), należące do rodziny receptorów jądrowych, funkcjonujących jako czynniki transkrypcyjne aktywowane liganiem. Wyróżnia się dwie izoformy jądrowego receptora progesteronowego, PRA i PRB. Obie są produktem tego samego genu, lecz posiadają różne promotory.Celem przedstawionej pracy było zbadanie wpływu agonisty receptora androgenowego (testosteronu) i antagonisty (2-hydroxyflutamidu) na ekspresję PRA w hodowanych komórkach ziarnistych i całych pęcherzykach jajnikowych świni. Komórki ziarniste izolowano z pęcherzyków jajnikowych dojrzałych płciowo świń, a następnie hodowano przez 24 godzin w obecności testosteronu (T), 2-hydroxyflutamidu (2-Hf), a także testosteronu w obecności 2-hydroxyflutamidu (T+2-Hf). Aby lepiej odtworzyć warunki panujące in vivo, izolowano całe pęcherzyki jajnikowe (o średnicy 6-8 mm), a następnie inkubowano przez okres 24 godzin na granicy dwóch faz, w obecności tych samych czynników. Po zakończeniu hodowli, komórki i skrawki otrzymane z hodowanych pęcherzyków, zostały poddane barwieniu immunocyto- oraz immunohistochemicznemu na obecność PRA. W celu potwierdzenia specyficzności przeciwciała stosowanego w immunocyto- i immunohistochemii, a także ilościowego zbadania ekspresji białka PRA zastosowano analizę Western- blot. Wykazano, że inkubacja zarówno komórek ziarnistych, jak całych pęcherzyków z testosteronem w obecności 2-Hf zwiększa ekspresję białka PRA. Sam 2-Hf wykazał właściwości anty-progestagenne. Podsumowując, stwierdzono, że androgeny mają wpływ na ekspresję białka PRA w pęcherzykach jajnikowych świni.