Validation of a method for resveratrol quantification using HPLC technique with UV detection.

Celem pracy była walidacja metody oznaczania resweratrolu z zastosowaniem techniki HPLC z detekcją UV w osoczu myszy. W ramach badań dokonano również oceny profilu farmakokinetycznego tego związku u myszy oraz zbadano bezwzględną biodostępność po podaniu dożołądkowym tego związku w postaci roztworu oraz matrycy likopenowej. Pomiary absorbancji resweratrolu wykonano przy analitycznej długość fali równej 303 nm, rozdział chromatograficzny przeprowadzono na kolumnie Hypersil BDS C18 (125x4,6mm, Thermo Scientific). Próbki oczyszczano poprzez strącenie białka z zastosowaniem mieszaniny acetonitryl:aceton (2:1). Opracowana metoda spełnia kryteria walidacji EMA dla badań bioanalitycznych i może być używana do oznaczania resweratrolu w osoczu myszy. Metoda cechuje się wysoką precyzją i dokładnością, liniowością odpowiedzi detektora (r = 0.9929) oraz zadowalającą czułością (LOQ = 100 ng/mL). Wykazano niską biodostępność resweratrolu w postaci roztworu (F = 7.20%) oraz w matrycy likopenowej (F = 3.26%) po podaniu dożołądkowym. Podanie tego związku w połączeniu z likopenem nie skutkowało poprawieniem jego biodostępności.

The aim of the study was validation of a method for resveratrol quantification using HPLC technique with UV detection. Additionally, assessment of pharmacokinetic profile in mice and absolute bioavailability when administered intragastrically in solution or lycopene matrix was performed. Absorbance measurements were carried out in UV at 303 nm. Hypersil BDS C18 (125x4,6mm, Thermo Scientific) column for chromatographic separation was used. Protein precipitation was performed with the composition of acetonitrile and acetone (2:1). Developed method complies with EMA validation guideline for bioanalytical studies and can be used for resveratrol quantification in murine plasma. The method is highly precise and accurate, detector response is linear (r = 0.9929). Developed method has sufficient sensitivity (LOQ = 100 ng/mL). Low resveratrol bioavailability in the solution (F = 7.20%) and in the lycopene matrix (F = 3.26%) after intragastric administration was demonstrated. This compound administration with lycopene did not lead to its bioavailability improvement.