Phytochemical analysis of formononetin and its derivatives in Trifolium medium

Koniczyna pogięta (Trifolium medium L.) stanowi gatunek należący do rodziny Fabeceae (bobowate), która obejmuje około 300 gatunków roślin. Dzięki zawartości wielu związków biologicznie aktywnych (np. izoflawony), roślina ta posiada szerokie zastosowanie w terapii np. przeciwnowotworowej, łagodzi objawy menopauzy i osteoporozy, a także wpływa korzystnie na stan skóry. Dzięki temu roślina ta stała się przedmiotem intensywnych badań fitochemicznych.CEL: Celem pracy było przeprowadzenie analizy ilościowej formononetyny i ononiny na przestrzeni okresu wegetatywnego, występujących w metanolowych ekstraktach Trifolim medium. Dla realizacji tych celów podjęto próbę opracowania warunków analizy jakościowej (TLC) i ilościowej (HPLC) wybranych izoflawonów występujących w koniczynie pogiętej.MATERIAŁ I METODY: Do przeprowadzeni analizy zebrano materiał roślinny na terenie Wydziału Farmaceutycznego CM UJ w okresie czerwiec- sierpień 2012. Materiał wysuszono, odważono po 4 g surowca i poddano ekstrakcji. Ekstrakty Trifolium medium poddano analizie jakościowej i ilościowej metodami żelowej chromatografii cienkowarstwowej (TLC) i wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC). WYNIKI: Analiza jakościowa pokazała, że główną frakcją związków występujących w koniczynie pogiętej są izoflawony. Podczas analizy jakościowej zauważono wyższą koncentracje ononiny w okresie wegetacji w porównaniu ze stężeniem formononetyny. Dodatkowo podczas pracy podjęto próbę izolacji ononiny, którą poddano hydrolizie enzymatycznej. Produktem powstałym wyniku hydrolizy jest formononetyna. WNIOSKI:. Formononetyna i ononina stanowią główne związki występujące w ekstraktach koniczyny pogiętej. Na przestrzeni okresu wegetacyjnego rośliny stężenie formononetyny maleje, natomiast stężenie ononiny nie zmienia się znacznie. W wyniku działań dopracowano metody analizy jakościowej (TLC) i ilościowej (HPLC) dla wybranych izoflawonów występujących w koniczynie pogiętej.

Zig- zag clover (Trifolium medium L.) is a species belonging to the family Fabeceae, which includes about 300 species of plants. Thanks to the content many of biologically active compounds (isoflavones), this plant is widely used in the treatment, for example anticancer activity, alleviates menopausal symptoms and osteoporosis. Additionally, isoflavones have a beneficial effect on the skin. As a result, this plant has been the subject of intensive research phytochemicals.OBJECTIVE: The aim of this study was to analyze the quantitative formononetin and ononin over the period of vegetative occurring in Trifolim medium extracts. To achieve these objectives, an attempt was made to develop the qualitative analysis (TLC) and quantitative (HPLC) of selected isoflavones found in zig- zag clover. MATERIALS AND METHODS: To analyze the collected plant material within the Faculty of Pharmacy of the Jagiellonian University in June-August 2012. The material was dried, weighed (4 g) of raw material and subjected to extraction. Trifolium medium extracts were analyzed for qualitative and quantitative by thin-layer liquid chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography (HPLC). RESULTS: Qualitative analysis showed that a major fraction of compounds are isoflavones in zig- zag clover. During the qualitative analysis observed higher concentrations ononin at the turn of every months compared with the concentration of formononetin. In addition, the study attempts to ononin isolation, which was hydrolyzed enzymatically. The product formed by hydrolysis was formononetin.CONCLUSIONS: Formononetin and ononin are the main compounds in Zig- zag clover extracts. During the vegetative period of plants formononetin concentration decreases, whereas the concentration of ononin doesn’t change much. As a result of refined methods of qualitative analysis (TLC) and quantitative (HPLC) for the selected isoflavones found in zig- zag clover.