Optimization of protocol for staining LAMP-1 protein in Vero cell line, using the method of indirect immunofluorescence

LAMP-1 to ważne białko, będące głównym składnikiem błon lizosomów, które uczestniczą w procesach pobierania materiału z zewnątrz komórki. Doświadczenie miało za cel zoptymalizowanie wizualizacji białka LAMP-1 w komórkach linii Vero, z użyciem metody immunofluorescencji pośredniej. Podczas wykonywania ćwiczenia badano wpływ zmian stężeń roztworów użytych do blokowania, rozcieńczenia przeciwciał pierwszorzędowych, oraz płukania przeciwciał pierwszorzędowych, a także zmiana roztworu permeabilizującego na zawierający inny odczynnik. Uzyskane wyniki umożliwiły uzyskanie lepszych wyników z protokołu barwienia białka LAMP-1. Wyniki te mogą zostać użyte do badań zachowania lizosomów w komórce, na przykład do analizy lizosomalnego transportu wirionów w komórce.

LAMP-1 is an important protein, and the main ingredient of lysosomal membranes, with lysosomes participating in the process of importing extracellular resources into the cell. The experiment was performed with the objective of optimizing visualization of LAMP-1 protein in Vero cell line, using the method of indirect immunofluorescence. During the experiment, effects of changing the concentration of the solution used in the blocking stage, to dilute primary antibodies, and wash primary antibodies, as well as changing the reagent used for permeabilizing, were tested. Acquired data has allowed optimization of the staining protocol, leading to higher quality of visualization. This data can be used to research behaviour of lysosomes in the cell, for example, to analyze lysosomal transport of a virion inside the cell