Simple view
Full metadata view
Authors
Statistics
Optymalizacja produkcji białka huLwCas13a
huLwCas13a Protein production optimisation
huLwCas13a, SHERLOCK, oczyszczanie białka, optymalizacja, chromatografia powinowactwa z użyciem metki histydynowej (IMAC), chromatografia jonowymienna (IEC), sączenie molekularne (SEC), metka 6xHis-TwinStrep-SUMO, proteaza SUMO, dichroizm kołowy, NanoDSF
huLwCas13a, SHERLOCK, protein purification, optimisation, affinity chromatography (IMAC), ion exchange chromatography (IEC), size-exclusion chromatography (SEC), 6xHis-TwinStrep-SUMO tag, SUMO protease, circular dichroism, NanoDSF
SHERLOCK (ang. Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking) jest metodą, która przyszłościowo może znaleźć szerokie zastosowanie do szybkiej i czułej detekcji kwasów nukleinowych. Do przeprowadzenia testu niezbędne jest czyste i aktywne białko z rodziny Cas wykazujące aktywność trans-tnącą (ang. collateral activity). Na skutek badań opracowano protokół oczyszczania białka Cas13a z Leptotrichia wadeii, składający się z 3 kroków: chromatografii powinowactwa z użyciem metki histydynowej, chromatografii jonowymiennej oraz sączenia molekularnego. Wykazano, że odcinanie metki 6xHis-TwinStrep-SUMO jest zbędnym krokiem i można go wyeliminować bez znaczącego wpływu na funkcjonalność, stabilność i strukturę białka.
SHERLOCK (Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking) is a method that in the future may be widely applied for rapid and sensitive detection of nucleic acids. For effective operation of the assay pure and active Cas-protein possessing so called ‘collateral activity’ is needed. As a result of the study, the protein purification protocol for Cas13a protein form Leptotrichia wadeii was developed, consisting of 3 steps: affinity chromatography (IMAC), ion exchange chromatography (IEC) and size-exclusion chromatography (SEC). It was proved that cutting off 6xHis-TwinStrep-SUMO tag is an unnecessary step that may be eliminated without significantly changing the protein’s function, stability and structure.
dc.abstract.en | SHERLOCK (Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking) is a method that in the future may be widely applied for rapid and sensitive detection of nucleic acids. For effective operation of the assay pure and active Cas-protein possessing so called ‘collateral activity’ is needed. As a result of the study, the protein purification protocol for Cas13a protein form Leptotrichia wadeii was developed, consisting of 3 steps: affinity chromatography (IMAC), ion exchange chromatography (IEC) and size-exclusion chromatography (SEC). It was proved that cutting off 6xHis-TwinStrep-SUMO tag is an unnecessary step that may be eliminated without significantly changing the protein’s function, stability and structure. | pl |
dc.abstract.pl | SHERLOCK (ang. Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking) jest metodą, która przyszłościowo może znaleźć szerokie zastosowanie do szybkiej i czułej detekcji kwasów nukleinowych. Do przeprowadzenia testu niezbędne jest czyste i aktywne białko z rodziny Cas wykazujące aktywność trans-tnącą (ang. collateral activity). Na skutek badań opracowano protokół oczyszczania białka Cas13a z Leptotrichia wadeii, składający się z 3 kroków: chromatografii powinowactwa z użyciem metki histydynowej, chromatografii jonowymiennej oraz sączenia molekularnego. Wykazano, że odcinanie metki 6xHis-TwinStrep-SUMO jest zbędnym krokiem i można go wyeliminować bez znaczącego wpływu na funkcjonalność, stabilność i strukturę białka. | pl |
dc.affiliation | Wydział Biochemii, Biofizyki i Biotechnologii | pl |
dc.area | obszar nauk przyrodniczych | pl |
dc.contributor.advisor | Figiel, Małgorzata - 106889 | pl |
dc.contributor.author | Nowicka, Monika - USOS302145 | pl |
dc.contributor.departmentbycode | UJK/WBBB | pl |
dc.contributor.reviewer | Figiel, Małgorzata - 106889 | pl |
dc.contributor.reviewer | Bzowska, Monika - 127507 | pl |
dc.date.accessioned | 2024-07-08T23:14:41Z | |
dc.date.available | 2024-07-08T23:14:41Z | |
dc.date.submitted | 2024-07-05 | pl |
dc.fieldofstudy | biotechnologia | pl |
dc.identifier.apd | diploma-176243-302145 | pl |
dc.identifier.uri | https://ruj.uj.edu.pl/handle/item/373390 | |
dc.language | pol | pl |
dc.subject.en | huLwCas13a, SHERLOCK, protein purification, optimisation, affinity chromatography (IMAC), ion exchange chromatography (IEC), size-exclusion chromatography (SEC), 6xHis-TwinStrep-SUMO tag, SUMO protease, circular dichroism, NanoDSF | pl |
dc.subject.pl | huLwCas13a, SHERLOCK, oczyszczanie białka, optymalizacja, chromatografia powinowactwa z użyciem metki histydynowej (IMAC), chromatografia jonowymienna (IEC), sączenie molekularne (SEC), metka 6xHis-TwinStrep-SUMO, proteaza SUMO, dichroizm kołowy, NanoDSF | pl |
dc.title | Optymalizacja produkcji białka huLwCas13a | pl |
dc.title.alternative | huLwCas13a Protein production optimisation | pl |
dc.type | licenciate | pl |
dspace.entity.type | Publication |