Optymalizacja produkcji białka huLwCas13a

licenciate
dc.abstract.enSHERLOCK (Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking) is a method that in the future may be widely applied for rapid and sensitive detection of nucleic acids. For effective operation of the assay pure and active Cas-protein possessing so called ‘collateral activity’ is needed. As a result of the study, the protein purification protocol for Cas13a protein form Leptotrichia wadeii was developed, consisting of 3 steps: affinity chromatography (IMAC), ion exchange chromatography (IEC) and size-exclusion chromatography (SEC). It was proved that cutting off 6xHis-TwinStrep-SUMO tag is an unnecessary step that may be eliminated without significantly changing the protein’s function, stability and structure.pl
dc.abstract.plSHERLOCK (ang. Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking) jest metodą, która przyszłościowo może znaleźć szerokie zastosowanie do szybkiej i czułej detekcji kwasów nukleinowych. Do przeprowadzenia testu niezbędne jest czyste i aktywne białko z rodziny Cas wykazujące aktywność trans-tnącą (ang. collateral activity). Na skutek badań opracowano protokół oczyszczania białka Cas13a z Leptotrichia wadeii, składający się z 3 kroków: chromatografii powinowactwa z użyciem metki histydynowej, chromatografii jonowymiennej oraz sączenia molekularnego. Wykazano, że odcinanie metki 6xHis-TwinStrep-SUMO jest zbędnym krokiem i można go wyeliminować bez znaczącego wpływu na funkcjonalność, stabilność i strukturę białka.pl
dc.affiliationWydział Biochemii, Biofizyki i Biotechnologiipl
dc.areaobszar nauk przyrodniczychpl
dc.contributor.advisorFigiel, Małgorzata - 106889 pl
dc.contributor.authorNowicka, Monika - USOS302145 pl
dc.contributor.departmentbycodeUJK/WBBBpl
dc.contributor.reviewerFigiel, Małgorzata - 106889 pl
dc.contributor.reviewerBzowska, Monika - 127507 pl
dc.date.accessioned2024-07-08T23:14:41Z
dc.date.available2024-07-08T23:14:41Z
dc.date.submitted2024-07-05pl
dc.fieldofstudybiotechnologiapl
dc.identifier.apddiploma-176243-302145pl
dc.identifier.urihttps://ruj.uj.edu.pl/handle/item/373390
dc.languagepolpl
dc.subject.enhuLwCas13a, SHERLOCK, protein purification, optimisation, affinity chromatography (IMAC), ion exchange chromatography (IEC), size-exclusion chromatography (SEC), 6xHis-TwinStrep-SUMO tag, SUMO protease, circular dichroism, NanoDSFpl
dc.subject.plhuLwCas13a, SHERLOCK, oczyszczanie białka, optymalizacja, chromatografia powinowactwa z użyciem metki histydynowej (IMAC), chromatografia jonowymienna (IEC), sączenie molekularne (SEC), metka 6xHis-TwinStrep-SUMO, proteaza SUMO, dichroizm kołowy, NanoDSFpl
dc.titleOptymalizacja produkcji białka huLwCas13apl
dc.title.alternativehuLwCas13a Protein production optimisationpl
dc.typelicenciatepl
dspace.entity.typePublication
dc.abstract.enpl
SHERLOCK (Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking) is a method that in the future may be widely applied for rapid and sensitive detection of nucleic acids. For effective operation of the assay pure and active Cas-protein possessing so called ‘collateral activity’ is needed. As a result of the study, the protein purification protocol for Cas13a protein form Leptotrichia wadeii was developed, consisting of 3 steps: affinity chromatography (IMAC), ion exchange chromatography (IEC) and size-exclusion chromatography (SEC). It was proved that cutting off 6xHis-TwinStrep-SUMO tag is an unnecessary step that may be eliminated without significantly changing the protein’s function, stability and structure.
dc.abstract.plpl
SHERLOCK (ang. Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking) jest metodą, która przyszłościowo może znaleźć szerokie zastosowanie do szybkiej i czułej detekcji kwasów nukleinowych. Do przeprowadzenia testu niezbędne jest czyste i aktywne białko z rodziny Cas wykazujące aktywność trans-tnącą (ang. collateral activity). Na skutek badań opracowano protokół oczyszczania białka Cas13a z Leptotrichia wadeii, składający się z 3 kroków: chromatografii powinowactwa z użyciem metki histydynowej, chromatografii jonowymiennej oraz sączenia molekularnego. Wykazano, że odcinanie metki 6xHis-TwinStrep-SUMO jest zbędnym krokiem i można go wyeliminować bez znaczącego wpływu na funkcjonalność, stabilność i strukturę białka.
dc.affiliationpl
Wydział Biochemii, Biofizyki i Biotechnologii
dc.areapl
obszar nauk przyrodniczych
dc.contributor.advisorpl
Figiel, Małgorzata - 106889
dc.contributor.authorpl
Nowicka, Monika - USOS302145
dc.contributor.departmentbycodepl
UJK/WBBB
dc.contributor.reviewerpl
Figiel, Małgorzata - 106889
dc.contributor.reviewerpl
Bzowska, Monika - 127507
dc.date.accessioned
2024-07-08T23:14:41Z
dc.date.available
2024-07-08T23:14:41Z
dc.date.submittedpl
2024-07-05
dc.fieldofstudypl
biotechnologia
dc.identifier.apdpl
diploma-176243-302145
dc.identifier.uri
https://ruj.uj.edu.pl/handle/item/373390
dc.languagepl
pol
dc.subject.enpl
huLwCas13a, SHERLOCK, protein purification, optimisation, affinity chromatography (IMAC), ion exchange chromatography (IEC), size-exclusion chromatography (SEC), 6xHis-TwinStrep-SUMO tag, SUMO protease, circular dichroism, NanoDSF
dc.subject.plpl
huLwCas13a, SHERLOCK, oczyszczanie białka, optymalizacja, chromatografia powinowactwa z użyciem metki histydynowej (IMAC), chromatografia jonowymienna (IEC), sączenie molekularne (SEC), metka 6xHis-TwinStrep-SUMO, proteaza SUMO, dichroizm kołowy, NanoDSF
dc.titlepl
Optymalizacja produkcji białka huLwCas13a
dc.title.alternativepl
huLwCas13a Protein production optimisation
dc.typepl
licenciate
dspace.entity.type
Publication
Affiliations

* The migration of download and view statistics prior to the date of April 8, 2024 is in progress.

Views
7
Views per month
Views per city
Warsaw
3
Bytom
1
Krakow
1
Lodz
1
Szczecin
1

No access

No Thumbnail Available