Isolation and evaluation of anti-inflammatory activity of saponins of Ardisia crenata 'alba'.

Ardisia crenata jest gatunkiem od stuleci znanym i stosowanym w systemie Tradycyjnej Medycyny Chińskiej. Korzeń rośliny, surowiec „zhu sha gen”, wspominany jest w kontekście właściwości przydatnych, w stanach chorobowych górnych dróg oddechowych, gdzie wykazuje działanie przeciwobrzękowe i przeciwzapalne. W oparciu o dane literaturowe, dotyczące zarówno właściwości leczniczych znanych już saponin triterpenowych, jak również informacje o związkach, które do tej pory udało się pozyskać z podziemnych części rośliny, badania opisane w niniejszej pracy zostały podjęte, w celu określenia właściwości przeciwzapalnych saponin korzenia Ardisia crenata odmiany białej, popularnie zwanej „alba”. W toku izolacji substancji, przeprowadzono sekwencyjną ekstrakcję sproszkowanego surowca chloroformem, metanolem oraz butanolem. Chromatografia kolumnowa wyciągu butanolowego, a następnie wielokrotne oczyszczanie metodą cienkowarstwowej chromatografii preparatywnej pozwoliła wyodrębnić saponinę, określoną symbolem SbW.Analiza LC-MS oraz 13C NMR -wykazała, że saponina SbW jest mieszaniną dwóch związków tj. ardisiakryspiny A i B. Testy przeciwzapalne planowano przeprowadzić w modelu in vitro, z wykorzystaniem makrofagów RAW 264.7, jednak wcześniejsza kontrola toksyczności, wykluczyła dalsze analizy. Przy najniższym, zastosowanym stężeniu otrzymanych związków tj. 5 µg/ml, cytotoksyczność wyniosła 85,43±0,56%. Testy hamowania hialuronidazy oraz denaturacji albuminy, dostarczyły natomiast informacji, o nikłych właściwościach przeciwzapalnych mieszaniny ardisiakryspiny A i B.

Ardisia crenata is a species known and used in Traditional Chinese Medicine for centuries.’ Zhu sha gen’ is mentioned in the context of properties useful in treating diseases of the upper respiratory tract. Based on the literature data on both the healing properties of the already known triterpene saponins, as well as information on the compounds that have been obtained so far from the underground parts of the plant, the research described in this paper was undertaken to determine the anti-inflammatory properties of saponins the root of Ardisia crenata the white variety. In the course of isolation, sequential extraction of the powdered raw material with chloroform, methanol and butanol was performed. Column chromatography of the butanol extract followed by multiple purifications by preparative thin-layer chromatography allowed the isolation of a saponin, denoted by the symbol SbW. The analysis of NMR spectra and mass spectroscopy showed that SbW is a mixture of two compounds: ardisiacrispin A and B. Anti-inflammatory tests were planned to be performed in an in vitro model, using RAW 264.7 macrophages, however, the earlier control of the toxicity of SbW had excluded its further analyzes. At the lowest concentration, i. e. at 5 µg/ml, the cytotoxicity was 85.43 ± 0.56%. On the other hand, tests of hyaluronidase inhibition and albumin denaturation provided information about the low anti-inflammatory properties of the ardisiacrispin A and B mixture.