Analysis of the MCPIP1 protein expression in human neuroblastoma BE(2)-C cell line

Neuroblastoma, belongs to a group of malignant cancers. It develops from the neural crest, which in normal conditions arises from adrenal glands and ganglions of sympathetic nervous system. Neuroblastoma is the most common extracranial solid tumor of childhood, which the cause is still unknown. Today, lots of new potential therapies are being researched that will either stop the tumor growth, inhibit metastasis, or eliminate symptoms, in hopes of finding a cure for these young patients. One potential therapeutic target might be MCPIP1 protein, which has been discovered recently and is still intensively studied.The aim of this study is to analyze the overexpression of the MCPIP1 protein and its mutants in the human neuroblastoma cell line in in vitro conditions. This study also attempts to demonstrate the impact of the full form MCPIP1 protein overexpression as well as the mutant form, which lacks the PIN domain (RNAse) on the cell viability and the level of proliferation in human neuroblastoma BE(2)-C cell line. The overexpression analysis of MCPIP1 protein, its impact on cell viability, and the level of cell proliferation were performed on the basis of everyday microscopic observations and molecular biology techniques: Western blot, measurement of the level of ATP molecules to determine cell viability, and the quantification of BrdU to determine the level of cell proliferation.On the basis of the results, it was shown that cell viability, the level of cell proliferation, the growth rate, and the behavior in the culture was dependent on the level of overexpression and on the type of the MCPIP1 protein produced in the BE(2)-C human neuroblastoma cell line. The effect of high overexpression of both forms of the MCPIP1 protein showed a significant reduction in cell viability and the level of cell proliferation. It was shown that the PIN domain, apart from its known RNAse function, shortens the life expectancy of the cells and inhibits their division.

Neuroblastoma - nerwiak zarodkowy współczulny, należy do grupy nowotworów złośliwych. Rozwija się z listewki nerwowej, z której w prawidłowych warunkach powstają nadnercza i zwoje układu współczulnego. Neuroblastoma jest jednym z najczęściej występujących pozaczaszkowych nowotworów litych wieku dziecięcego, którego przyczyna nie jest znana. Obecnie poszukuje się nowych, potencjalnych terapii, które pozwolą na całkowite wyleczenie młodego pacjenta, względnie zahamują wzrost guza, przerzutowanie oraz wyeliminują objawy. Takim potencjalnym celem terapeutycznym jest białko MCPIP1, które stosunkowo niedawno zostało odkryte i jest cały czas intensywnie badane. Celem prezentowanej pracy była analiza ekspresji białka MCPIP1 i jego mutantów, w komórkach nerwiaka zarodkowego współczulnego w warunkach in vitro oraz próba wykazania wpływu nadekspresji pełnej formy białka i mutanta pozbawionego domeny PIN (RNA-zy) na żywotność i poziom proliferacji komórek ludzkiej linii neuroblastoma BE(2)-C. Analiza ekspresji białka MCPIP1 oraz wpływ nadekspresji białka MCPIP1 na żywotność i poziom proliferacji komórek zostały wykonane na podstawie codziennych obserwacji mikroskopowych oraz przy pomocy technik często wykorzystywanych w biologii molekularnej: Western blot, badanie poziomu ATP do oznaczenia żywotności oraz ilości BrdU do oznaczenia poziomu proliferacji komórek.Na podstawie otrzymanych wyników wykazano, że zarówno żywotność komórek, poziom ich proliferacji, szybkość wzrostu oraz zachowanie w hodowli są zależne od poziomu nadekspresji, jak i typu białka MCPIP1 produkowanego w komórkach ludzkiej linii neuroblastoma BE(2)-C. Skutkiem wysokiej nadekspresji obu form białka MCPIP1 jest znaczne obniżenie żywotności oraz poziomu proliferacji komórek. Wykazano, że domena PIN, oprócz swej znanej już funkcji RNAzowej, skraca czas życia komórek oraz hamuje ich podziały.