Optimization of the Fc fragment production by papain enzymatic proteolysis of murine IgG3 antibodies produced by M18 hybridoma cells

Przeciwciała Miraculum są przeciwciałami uzyskanymi metodą hybrydoma. Należą do mysiej podklasy IgG3 i specyficznie wiążą ludzki antygen B występujący na erytrocytach grupy krwi B. Są w stanie hemaglutynować erytrocyty grupy krwi B, co jest wyjątkowe, gdyż do niedawna sądzono, że taką zdolność mają tylko o wiele większe pentamery utworzone przez klasy IgM. Ciekawe właściwości skłoniły naukowców do dokładniejszych badań, które ustaliły, że swoje charakterystyczne właściwości Miraculum zawdzięcza domenie CH2 znajdującej się we fragmencie Fc przeciwciała. Niniejsza praca skupia się na optymalizacji procesu enzymatycznego otrzymywania fragmentów Fc z całych przeciwciał Miraculum, które następnie miałyby być wykorzystane do otrzymania kryształów i analizy krystalograficznej. Nie udało się osiągnąć wszystkich postawionych celów, ale ustalono, że enzymatyczna proteoliza za pomocą papainy daje możliwość uzyskania fragmentów Fc z całych przeciwciał. Należy kontynuować badania, gdyż ustalenie dokładnej budowy za pomocą metody krystalograficznej może pomóc w opracowaniu metody uzyskiwania przeciwciał lub białek rekombinowanych na bazie przeciwciał o nowych, unikalnych cechach.

Miraculum are antibodies created by the hybridoma method. They belong to the mouse IgG3 subclass and bind specifically to the human B antigen present on blood group B erythrocytes. They are able to hemagglutinate blood group B erythrocytes. It is unique because until recently, it was believed that only much larger IgM pentamers had such an ability. Interesting properties prompted scientists to carry out more detailed research, which established that Miraculum owes its characteristic properties to the CH2 domain located in the Fc fragment of the antibody. This work focuses on the optimization of the enzymatic process for obtaining Fc fragments. These fragments were to be used for crystal preparation and crystallographic analysis. The process failed. However, it was established that enzymatic proteolysis with papain makes it possible to obtain Fc fragments from whole antibodies. Research should continue to study the exact structure of the domain. Examination of the structure may give a new useful domain that can be used in antibody engineering to produce antibodies or recombinant proteins with new properties.