Optimization of expession and purification conditions of human interleukin-1 (IL-1)

Ludzka interleukina-1 (hIL-1) jest jednym z białek, które odgrywają ważną role w rozwoju stanu zapalnego. Przez lata poznawano funkcje oraz strukturę hIL-1 w celu głębszego zrozumienia powstawania stanu zapalnego. Z czasem wiele laboratoriów skupiło się na projektowaniu i produkcji tego białka. Jednym ze sposobów produkcji wspomnianego białka jest otrzymanie hIL-1β z bakterii posiadających plazmid pCellFree_G03 IL1B. Umożliwia to uzyskanie cytokiny w formie białka fuzyjnego. W przedstawionej pracy skupiono się na optymalizacji warunków hodowli bakterii, dostosowaniu procesu obróbki materiału w celu odzyskiwania białka z bakterii oraz jego oczyszczeniu w warunkach niedenaturujących. Ustalono wykorzystanie N-laurylosarkozylu do rozpuszczania ciałek inkluzyjnych oraz dobrano warunki oczyszczania białka na kolumnie niklowej. Do oczyszczania zastosowano łagodne warunki, a wyniki analizowano metodą Western Blot i Dot Blot. Celem nadrzędnym projektu było wykorzystanie oczyszczonego białka jako antygen do produkcji przeciwciał.

Human interleukin-1 (hIL-1) is one of the proteins that play an important role in the development of inflammation. Over the years, the functions and structure of hIL-1 have been studied in order to gain a deeper understanding of the formation of inflammation. Throughout this process, many laboratories noticed the importance of the protein for inflammation research and focused on its production. One of the production methods is to obtain hIL-1β from bacteria carrying the pCellFree_G03 IL1B plasmid. This makes it possible to obtain a cytokine in the form of a fusion protein. The work presented here focuses on the ways of optimizing bacterial culture conditions, adjusting material processing to recover the protein from bacteria, and purifying it under non-denaturing conditions. The use of N-laurylsarcosyl to dissolve inclusion bodies was established, and the conditions for purifying the protein on a nickel column were selected. Mild conditions were used for purification, and the results were analyzed using the Western Blot and Dot Blot methods. The main goal of the project was to use purified protein as an antigen for the production of antibodies.