Toxicity assessment of SipB protein variants in bacteria Salmonella enterica serovar Typhimurium on infected RAW 264.7 cells.

Modyfikowane genetycznie szczepy bakterii Salmonella to potencjalnie nowa broń w walce z nowotworami. Celem mojej pracy było zanalizowanie jak modyfikacja bakterii Salmonella Typhimurium polegająca na nadekspresji różnych wariantów proapoptotycznego, naturalnego dla tej bakterii, białka SipB wpłynie na zdolność bakterii do zabijania komórek linii monocytarno-makrofagowej RAW 264.7.Komórki RAW 264.7 były zakażane szczepami Salmonella niosącymi wektory kodujące warianty białka SipB . Białka te posiadały natywny N-koniec i w różnym stopniu skrócony C-koniec.Po 2 i 24 h od zakażenia analizowano w mikroskopie świetlnym morfologię komórek makrofagowych oraz analizowano cytotoksyczny efekt zakażenia przez pomiar aktywności enzymu LDH uwolnionego do pożywki hodowlanej. Stwierdzono, że niezależnie od niesionych wektorów wszystkie szczepy wywoływały aktywację komórek RAW 264.7, co wyrażało się przez typową zmianę ich morfologii po 24 godzinach od infekcji. Nie obserwowano wzmożonej śmierci komórek po 2 godzinach od zakażenia. Błąd w przeprowadzeniu eksperymentu uniemożliwił rzetelną ocenę wpływu zakażenia na żywotność RAW 264.7 po 24 h ale sugerował brak wpływu któregokolwiek z wariantów SipB na komórki makrofagów.

Genetically modified strains of Salmonella constitute a new potential weapon against cancer. The aim of my study was to analyze how modifications of Salmonella Typhimurium involving overexpression of different variants of its natural SipB protein will influence the ability of bacteria to kill RAW 264.7 cells of the monocyte-macrophage origin.These cells were infected with the strains of Salmonella carrying vectors encoding various SipB variants that have the native N-terminus and differentially shortened C-terminus.After 2 and 24 h post infection the morphology of the macrophage cells was analyzed by a light microscope and the cytotoxic effects of infection were analyzed by measuring the enzymatic activity of LDH released to the culture media. It was found that regardless of the carried vectors all strains activated RAW 264.7 cells , judged by typical changes in their morphology observed after 24 h post infection. No increased in the cell death was observed 2 after infection. Although an experimental error in the measurement of LDH released during 24 h after infection did not allow for reliable assessment of the impact of the Salmonella infection on the viability of RAW 264.7, the data suggest that the SipB variants do not affect RAW 264.7 viability.