Crystallization of onconase with ruthenium complex

Krystalizacja białek jest kluczowym etapem w badaniach rentgenostrukturalnych makrocząsteczek. Zidentyfikowanie warunków pozwalających na otrzymanie monokryształów badanego białka o odpowiedniej wielkości i jakości prowadzone jest często poprzez optymalizację warunków literaturowych. Celem pracy było zoptymalizowanie warunków najkorzystniejszych dla wzrostu kryształów onkonazy w formie niezwiązanej jak również w obecności kompleksu rutenu [RuCl4(DMSO)Ind] oraz [RuCl4(DMSO)Isq]. Krystalizację przeprowadzono metodą dyfuzji przez fazę gazową techniką wiszącej kropli. Szereg przeprowadzonych eksperymentów pozwolił na określenie optymalnego stężenia białka oraz odpowiedniego stężenia precypitanta. W oparciu o warunki krystalizacji onkonazy w formie niezwiązanej przeprowadzono krystalizację onkonazy w roztworze z ligandem. W wyniku przeprowadzonych prac otrzymano dobrej jakości kryształy onkonazy niezwiązanej i barwne kryształy onkonazy w efekcie eksperymentów kokrystalizacji z kompleksem rutenu.

Protein crystallization is the most important part in structural studies of macromolecules. To identify the conditions for protein crystals formation the optimization of previously reported conditions can be performed. The main goal of presented studies was to optimize onconase crystallization process with and without ruthenium complex. Crystallization was carried out by hanging-drop vapor diffusion. Crystallographic experiments allowed to determine the optimal concentration of protein and precipitant in composed drop. Additionally, onconase crystallization was carried out in the presence of ruthenium complex [RuCl4(DMSO)Ind] and [RuCl4(DMSO)Isq]. The conditions for cocrystallization were based on the most favorable environment found for protein crystal growth without ligand. As a result of those experiments good quality crystals were obtained. Both cocrystallization and soaking procedure successfully ended with crystals that were colored.