Optimization of conditions for the determination of chlorogenic acid in dietary supplements

Kwas chlorogenowy jest znany ze swoich korzystnych właściwości na organizm, m.in poprzez działanie przeciwutleniające i przeciwzapalne, z tego też względu często występuje na liście składników suplementów diety wspomagających odchudzanie. Jednak pomimo dostępnej na opakowaniu informacji na temat ilości tej substancji, nie można mieć pewności co do rzeczywistego składu produktu. W niniejszej pracy dokonano procesu optymalizacji warunków umożliwiających oznaczenie kwasu chlorogenowego w suplementach diety. Przedstawiono dobór odpowiednich metod ekstrakcji oraz analizy jakościowej i ilościowej substancji w gotowych produktach techniką chromatografii cienkowarstwowej z detekcją densytometryczną. W celu sprawdzenia wiarygodności opracowanej procedury, przeprowadzono jej walidację. W zakresie stężeń 0,08 - 0,60 μg/plamę otrzymano prostoliniową zależność (r = 0,9946). Obliczono wartości LOD i LOQ, które wyniosły kolejno 0,06 i 0,20 μg/plamę i potwierdziły czułość metody. Metoda wykazała się również wysoką precyzją bezpośrednią (RSD = 1,14%) oraz pośrednią (RSD = 1,16%). Zapewnienie dokładności zostało potwierdzone przez wyznaczenie odzysku, który wyniósł średnio 100,96%. Właściwą analizę przeprowadzono na płytkach chromatograficznych TLC Silicagel 60 F254 z zastosowaniem fazy ruchomej o składzie: octan etylu + woda + kwas mrówkowy (8:0,5:1,5; v/v/v). Otrzymane po skanowaniu densytogramy oraz widma absorpcji (przy długości fali 311 nm) zostały wykorzystane do identyfikacji kwasu chlorogenowego oraz do weryfikacji deklarowanej zawartości.Korzystając z opracowanej metody dokonano analizy suplementów diety zawierających ekstrakt z zielonej kawy lub herbaty. W większości produktów oznaczone zawartości różniły się od ilości podanych przez producentów, za wyjątkiem dwóch, w których zgodność obu wartości wyniosła blisko 100%.

Chlorogenic acid is known for its beneficial properties, due to its antioxidant and anti-inflammatory effects, which is why it is often found on lists of ingredients of weight loss supplements. However, despite the information about the ingredients available on the package, one cannot be sure of the actual composition.In this paper, optimizing the conditions allowing the determination of chlorogenic acid in dietary supplements was conducted. The selection of methods for extraction and qualitative and quantitative analysis of the substance by thin-layer chromatography with densitometric detection is presented. To check the reliability of the developed procedure, its validation was performed. In the concentration range of 0.08 - 0.60 μg/spot, a linear relationship was obtained (r = 0.9946). Calculated LOD and LOQ amounted to 0.06 and 0.20 μg/stain, respectively, confirming the sensitivity of the method. The method showed high direct (RSD = 1.14%) and indirect (RSD = 1.16%) precision. The accuracy was confirmed by determining the recovery, which averaged 100.96%. The analysis was carried out on Silicagel 60 F254 TLC chromatographic plates using a mobile phase consisting of ethyl acetate+water+formic acid (8:0.5:1.5, v/v/v). The densitograms and absorption spectra (at 311 nm) obtained after densitometric scanning were used to identify chlorogenic acid and to verify the claimed content.Using the developed method, supplements containing green coffee or tea extract were analyzed. In most of the products, the determined contents differed from the amounts claimed by the manufacturers, except for two, in which the compatibility of the two values was close to 100%.