Expression and purification of human recombinant Kallikrein 15 (KLK15) using the "Lexsy" protein expression system

Kalikreiny (KLKs) należą do grupy proteaz serynowych. Są kodowane przez geny zlokalizowane na chromosomie 19q13.4, a tym samym są reprezentowane przez największy klaster genów proteaz w całym genomie ludzkim. Ludzkie kalikreiny różnią się między sobą ekspresją i obecnością w poszczególnych tkankach, a także rolami fizjologicznymi. Podjęty eksperyment skupia się na kalikreinie 15, która jest jedną z najmniej poznanych kalikrein. Dowiedziono, że KLK15 występuje licznie w prostacie i tkankach płodu. Pomimo małej ilości wiedzy o tym enzymie, istnieje wiele przykładów chorób, z którymi może mieć związek z uwagi na obecność jej nadekspresji: rak piersi, rak jajnika, choroba Alzheimera. Eksperyment skupia się na ekspresji i oczyszczaniu ludzkiej rekombinowanej kalikreiny 15 (KLK15) z użyciem systemu ekspresji białek "Lexsy". System ten pozwala na otrzymanie KLK15 o wzorze glikozylacji podobnym do tego, jaki uzyskujemy w komórkach ludzkich. Głównym celem jest uzyskanie takiej ilości kalikreiny 15, jaka pozwoli na poznanie jej funkcji i podstawowych właściwości biochemicznych.

Tissue kallikreins are members of trypsin-like serine proteases. They are encoded by 15 structurally similar genes (KLK) that colocalize to chromosome 19q13.4. They represent the largest cluster of contiguous protease genes in the entire genome. The human tissue kallikrein and kallikrein-related peptidases (KLKs) have diverse expression patterns and physiological roles. This experiment relates to KLK15, which is one of the least known kallikrein. The most notable example of KLK15 expression has been found in the prostate and fetal tissues (at the mRNA level). The role of kallikrein 15 is not well known, but there is a lot of examples of diseases in which this enzyme is overexpressed, like breast cancer, Alzheimer's disease, ovarian cancer. This experiment involves expression and purification of human recombinant Kallikrein 15 (KLK15) using the "Lexsy" protein expression system. This system allows to receive the KLK15 with glycosylation pattern similar to human cells proteins' glycosylation. The aim is to get such amount of KLK15 which let us to know the function and biochemical properties of this enzyme.