Organizm ludzki radzi sobie z toksycznością leków podawanych doustnie poprzez ich metabolizm. Zrozumienie toksyczności leków komplikują interakcje między lekami. Większość leków jest metabolizowana przez cytochromy. Szczególnie ważne są (podobne do siebie) cytochromy CYP3A4 i CYP3A5. W związku z tym, istnieje duże zainteresowanie inhibitorami oraz selektywnymi substratami tych dwóch cytochromów. Ogólnym celem prowadzonych badań jest opracowanie nowych selektywnych metabolitów lub inhibit ów cytochromu CYP3A5, aby stworzyć nowe możliwości testowania leków in vitro. Badane jest osiem związków ABJ (syntetyzowanych przez Wrepredic oraz poufnych). Celem tej pracy było określenie ich potencjalnych zdolności inhibicyjnych i selektywności wobec cytochromów, sprawdzenie metabolizmu oraz dostarczenie danych pomocnych przy syntezie lepszych inhibitorów lub selektywnych substratów CYP3A5. Potencjał inhibicji oraz selektywność badanych związków badano za pomocą wysokorozdzielczej spektrometrii masowej (HRMS) sprzężonej z chromatografią cieczową. HRMS dokładnie określa masę jonów, co pozwala na identyfikację badanych związków oraz ich metabolitów. Wyniki pomiarów zinterpretowano na podstawie chromatogramów EIC. EIC to wykres przedstawiający zależność intensywność sygnału dla związku o dokładnej masie w funkcji jego czasu retencji w kolumnie chromatograficznej. Badanie wykazało, że spektrometrię mas można wykorzystać do monitorowania oraz określania roli inhibitorów lub substratów ośmiu badanych związków. Dzięki temu możliwe było sklasyfikowanie niektórych cząsteczek jako dobre lub złe inhibitory CYP3A5. Jednocześnie zbadano, czy cząsteczki te i ich różne szlaki metaboliczne są metabolizowane przez CYP3A5 (oraz CYP3A4 i CYP2D6) w ramach szukania alternatywy dla cząsteczki T-5 jako nowego substratu. Wyniki tych prac pokazują, że badane związki wykazują pewne właściwości inhibicji. Najskuteczniejszy inhibitor jest jednocześnie metabolizowany, co nie jest pożądane. Jeden z inhibitorów o mniejszej skuteczności jest metabolizowany z małą wydajnością. Dwa z ośmiu związków były selektywnie metabolizowane z dużą wydajnością.

Human body deals with toxicity of orally administered drugs by metabolizing them. The understanding of drug toxicity is complicated by drug-drug interactions. Most drugs are metabolised by cytochromes. Particularly important are two similar cytochromes CYP3A4 and CYP3A5. Consequently, there is a lot of interest in inhibitors and selective substrates of these cytochromes. The aim of the overall study is to develop new selective metabolites or inhibitors of CYP3A5 to open up new possibilities for in vitro drug testing. Eight ABJ compounds (synthesised at Wrepredic and confidential) are investigated. The goal of this work was to determine their inhibition capability and selectivity to the cytochromes, check for metabolism effects, and provide data for synthesising better inhibitors or selective substrates to CYP3A5. Inhibition potentials and metabolization selectivity of the investigated compounds were evaluated using high resolution mass spectrometry (HRMS) coupled with liquid chromatography. HRMS accurately determines the masses of ions, which allows for identification of tested compounds and their metabolites with great robustness. The results of the measurements were interpreted based on extracted ion chromatograms (EIC). An EIC is a graph displaying the signal intensity for a compound with a given exact mass versus the time of its retention in the column of the chromatograph. The study showed that mass spectrometry can be used to monitor and quantify the role of inhibitors or substrates of the eight compounds of interest. It was therefore possible to classify certain molecules as good or bad inhibitors of CYP3A5. At the same time, it was investigated whether these molecules and their different metabolic pathways were metabolised by CYP3A5 (and CYP3A4 and CYP2D6) as a screening for an alternative to the T-5 molecule as a new substrate. The tested compounds have some inhibition and substrate properties. The most effective inhibitor is also metabolised which is not desirable. One of the less effective inhibitors has a low rate of metabolization. Two of the eight compounds were selectively metabolized with a high rate.