Evaluation of the effects of docosahexaenoic acid and metformin in inflamed mouse adipocytes in the dose-incubation time relationship

Wielonienasycone kwasy tłuszczowe, w tym badany kwas dokozaheksaenowy odgrywają szczególną rolę w odpowiedzi na stan zapalny organizmu. Biorą udział w syntezie eikozanoidów, będących mediatorami lipidowymi stanu zapalnego, a także regulują ekspresję genów prozapalnych.Celem niniejszej pracy magisterskiej była ocena działania kwasu dokozaheksaenowego (DHA) i metforminy na poziom ekspresji genów i białek prozapalnych w mysich adiopocytach, aktywowanych lipopolisacharydem (LPS) w zależności dawka-czas inkubacji.Komórki linii 3T3-L1 zróżnicowano do adipocytów, a następnie inkubowano odpowiednio 24 godziny oraz 48 godzin z DHA (25 µmol lub 50 µmol) i/lub metforminą (MET, 10 µmol). Adipocyty aktywowano lipopolisacharydem (LPS z E.coli 5ng/ml) przez kolejne 24 godziny.Analizowano poziom cyklooksygenazy 2 (COX-2), syntazy prostaglandyny E2 (cPGES) oraz receptora TLR4 techniką immunodetekcji. Ekspresję genów Ptgs2 oraz Pla2g4a oznaczono techniką Real-Time-qPCR.Pomimo aktywacji komórek LPS, wykazano istotny spadek poziomu białek prozapalnych COX-2, cPGES oraz TLR4 w mysich adipocytach suplementowanych kwasem dokozaheksaenowym oraz metforminą i zależność od czasu inkubacji. Zaobserwowano również istotny spadek ekspresji genów prozapalnych.Przeprowadzone badania sugerują, iż kwas dokozaheksaenowy oraz metformina wykazują synergistyczne działanie przeciwzapalne.

Polyunsaturated fatty acids, including the tested docosahexaenoic acid, play a unique role in the response to inflammation in the body. They participate in the synthesis of eicosanoids, lipid mediators of inflammation, and regulate the expression of pro-inflammatory genes.This master's thesis aimed to assess the effect of docosahexaenoic acid (DHA) and metformin on the level of expression of pro-inflammatory genes and proteins in murine adipocytes activated by lipopolysaccharide (LPS) in a dose-incubation time relationship.The 3T3-L1 cell line was differentiated into adipocytes and then incubated for 24 and 48 hours with DHA (25 µmol or 50 µmol) and/or metformin (MET, 10 µmol), respectively. Adipocytes were activated with lipopolysaccharide (LPS from E.coli 5ng/ml) for another 24 hours.Cyclooxygenase 2 (COX-2) levels, prostaglandin E2 synthase (cPGES), and TLR4 were analyzed by immunodetection. The Real-Time-qPCR technique determined the expression of Ptgs2 and Pla2g4a genes.Despite the activation of LPS cells, a significant decrease in pro-inflammatory proteins COX-2, cPGES, and TLR4 in mouse adipocytes supplemented with docosahexaenoic acid and metformin was shown, and dependence on incubation time. A significant decrease in the expression of pro-inflammatory genes was also observed.The research suggests that docosahexaenoic acid and metformin have synergistic anti-inflammatory effects.