Analysis of Ccdc33 activity change in a mouse model with increased sperm DNA damage.

Spermatogeneza jest jednym z najważniejszych procesów zachodzących w organizmach żywych, kluczowym do produkcji męskich gamet oraz do zapłodnienia, co ma istotne znaczenie dla przedłużenia gatunku. Zrozumienie mechanizmów regulujących to zjawisko jest niezwykle istotne w kontekście pogarszających się parametrów nasienia oraz rosnącego odsetka niepłodnych par w ostatnich latach. W niniejszej pracy magisterskiej przeprowadzono analizę mysiego białka peroksysomalnego CCDC33. Dotychczasowe badania przeprowadzone w 2012 roku z wykorzystaniem białek fuzyjnych wskazały na ko-lokalizację białek CCDC33 i PXT1, co sugeruje, iż białka te występują w tym samym miejscu w komórce. Celem badań niniejszej pracy magisterskiej było zbadanie ekspresji białka CCDC33 w jądrach myszy z nokautem genu Pxt1 (Pxt1-/-) w porównaniu do myszy kontrolnych, aby ustalić, czy brak białka PXT1 wpływa na ekspresję CCDC33. W tym celu pobrano pośmiertnie wątroby myszy o genotypie Pxt1+/+ oraz jądra myszy o genotypie Pxt1+/+ i Pxt1-/-. Następnie wykorzystując homogenaty białek, określono ekspresję CCDC33 w tych tkankach za pomocą techniki Western Blot. Po raz pierwszy potwierdzono obecność białka CCDC33 w jądrach myszy z nokautem genu Pxt1. Podjęto także próbę określenia wewnątrzkomórkowej lokalizacji białka CCDC33, jednak uzyskane wyniki wskazują na konieczność dalszej optymalizacji warunków tej reakcji.

Spermatogenesis is one of the most important processes occurring in living organisms, crucial for the production of male gametes and fertilization, which is essential for the continuation of the species. Understanding the mechanisms regulating this phenomenon is extremely important in the context of deteriorating semen parameters and the increasing percentage of infertile couples in recent years. This master's thesis presents an analysis of the mouse peroxisomal protein CCDC33. Previous studies conducted in 2012 using fusion proteins indicated the co-localization of CCDC33 and PXT1 proteins, suggesting that these proteins are present in the same location within the cell. The aim of the research of this master's thesis was to investigate the expression of CCDC33 protein in the testes of mice with a knockout of the Pxt1 gene (Pxt1-/-) compared to control mice, to determine whether the absence of PXT1 protein affects the expression of CCDC33. For this purpose, livers from mice with the Pxt1+/+ genotype and testes from mice with the Pxt1+/+ and Pxt1-/- genotypes were collected post-mortem. Using protein homogenates, the expression of CCDC33 in these tissues was determined by Western Blot technique. For the first time, the presence of CCDC33 protein was confirmed in the testes of mice with a knockout of the Pxt1 gene. An attempt was also made to determine the intracellular localization of CCDC33 protein; however, the results obtained indicate the need for further optimization of the reaction conditions.