Analysis of interactions of MCPIP1 with transcripts involved in cancerogenesis

Białko MCPIP1 (monocytechemotactic protein-induced protein-1) nazywane również Regnase1 jest negatywnym regulatorem stanu zapalnego. MCPIP 1 obniża także żywotność oraz wzrost komórek nowotworowych poprzez regulacje transkryptów białek cyklu komórkowego i sygnalizacji komórkowej. Przejście epitelialno-mezenchymalne (EMT) charakteryzuje się zmianą fenotypu komórek z epitelialnego na fenotyp mezenchymalny, który wiąże się z utratą adhezji komórkowej oraz zwiększonym ruchem komórek. Występuje w komórkach prawidłowych, ale również w komórkach nowotworowych, co przyczynia się do zwiększania ich inwazyjności i rozprzestrzeniania się do innych tkanek. Zaobserwowano, że białko MCPIP1 wpływa na poziom markerów epitelialno-mezenchymalnych. Jego nadekspresja utrzymuje fenotyp epitelialny, natomiast wyciszenie powoduje wzrost markerów mezenchymalnych, co jest równoznaczne ze zwiększeniem złośliwości nowotworu. Celem pracy było sprawdzenie czy białko MCPIP1 wiąże i degraduje transkryptydla czynników transkrypcyjnych regulujących proces przejścia epitelialno-mezenchymalnego oraz białek, które są obecne w komórkach o fenotypie mezenchymalnym. Badania przeprowadzono na linii komórkowej jasnokomórkowego raka nerki Caki-1. W celu sprawdzenia poziomu związanych transkryptów przeprowadzono immunoprecypitację RNA związanego przez białko MCPIP1 D141N, które jest pozbawione aktywności RNazowej. Z otrzymanego RNA przeprowadzono rekcję odwrotnej transkrypcji oraz RT-PCR. Wyniki uzyskane z metody immunoprecypitacji wskazują, że białko MCPIP1 wpływa na degradację transkryptu FAK/PTK2 oraz może być zaangażowane w degradację transkryptów dla Yes oraz Src.

MCPIP1 (monocyte chemotactic protein-induced protein-1), also known as Regnase1, is a negative regulator of inflammation. MCPIP1 also influences the growth and viability of tumor cells by regulating the transcript levels for proteins involved in cell cycle progression and cell signaling. Epithelial to mesenchymal transition can be characterized by epithelial to mesenchymal phenotype switch, which is associated with loss of cell–cell adhesion, increased motility and invasion to the other tissues. MCPIP1 regulates the levels of transcripts for proteins involved in EMT. Overexpression of MCPIP1 supports epithelial phenotype, while downregulation promotes mesenchymal phenotype, which indicate the vital role of MCPIP1 of cancerogenesis. The aim of this study was to verify whether MCPIP1 is involved in binding and lowering the levels of transcripts for transcription factors regulating EMT and proteins inherent to cells with mesenchymal phenotype.Research was carried out at human clear cell renal cell carcinoma cell line Caki-1. Levels of transcripts were measured after immunoprecipitation of RNA bound by MCPIP1 D141N which is completely abolishes RNase activity. Using obtained RNA, reverse transcription and real-time PCR were carried out. Results suggested that MCPIP1 protein regulates the level of FAK/PTK2 transcript and can be involved in degradation of Yes and Src.