Studying the phenotype of the primary endothelial cells isolated from murine coronary microcirculation

Wyizolowane, pierwotne komórki śródbłonka naczyń wieńcowych myszy mogą stanowić obiecujący model do badań dotyczących przebiegu dysfunkcji śródbłonka mikronaczyń na różnym etapie rozwoju patologii. W procesie izolacji pierwotnych komórek śródbłonka wyróżniono kilka kluczowych etapów, które w toku pracy magisterskiej poddano optymalizacji. W ramach opracowanego protokołu izolacji pierwotnych, mysich komórek śródbłonka naczyń wieńcowych uzyskano średnio 1,53 mln komórek charakteryzujących się ekspresją cząsteczki CD31. Wyizolowane komórki odpowiadały na stymulację prozapalną z zastosowaniem TNF-α zwiększoną ekspresją selektyny E oraz cząsteczki VCAM-1 w stosunku do komórek śródbłonka nie poddanych stymulacji. Głównymi elementami optymalizacji metodyki izolacji pierwotnych komórek śródbłonka wieńcowego myszy ustalonymi doświadczalnie były: zastosowanie kolagenazy II o stężeniu 0,5 mg/ml w czasie 45-60 minutowej inkubacji z tkanką mięśnia sercowego, opłaszczenie powierzchni hodowlanej z zastosowanie żelatyny 0,1% oraz wybór metody separacji immunomagnetycznej CD31-pozytywnej w celu uzyskania czystej populacji pierwotnych komórek śródbłonka wieńcowego myszy. Opracowany protokół izolacji pierwotnych komórek śródbłonka naczyń wieńcowych myszy może nadawać się do oceny fenotypu komórek wyizolowanych z serc myszy Tg α q*44 na różnych etapach rozwoju dysfunkcji śródbłonka naczyniowego.

Isolated, primary coronary endothelial mouse-derived cells may provide a promising model for studies of the progression of endothelium dysfunction at different stages of pathology development. In the isolation process of primary endothelial cells, several key stages were identified, which during the course of the thesis were optimized. Within the established primary mouse heart-derived endothelial cells isolation protocol an average of 1,53 million cells were obtained. Isolated cells were characterized by expression of CD31 antigen and responded to proinflammatory stimulation with TNF-α by increased expression of selectin E and VCAM-1 molecules compared to non-stimulated primary endothelial cells. The conditions of the coronary endothelial cells isolation that were experimentally optimized in the frame of this work were as follows: application of collagenase II at a concentration of 0,5 mg/ml during 45-60 minutes of incubation with cardiac tissue, coat of culture surface with 0,1% gelatin and choice of CD31-positive immunomagnetic separation method to obtain a pure population of primary endothelial cells of the mouse heart microcirculation.The elaborated protocol for isolation of primary endothelial cells from mouse heart may be used to evaluate the phenotype of Tg α q * 44 mouse heart-isolated cells at various stages of development of coronary endothelial dysfunction.