Multicolor flow cytometry - area of interest of scientific research only, or inevitability in routine clinical diagnostics?

Wielokolorowa cytometria przepływowa (>8 kolorów) jest szeroko stosowaną metodą nie tylko w badaniach naukowych, ale jest również coraz szerzej wykorzystywana w rutynowych badaniach diagnostycznych. Zastosowanie wielokolorowych paneli przeciwciał w rutynowej diagnostyce, dzięki większej rozdzielczości badania, umożliwia wykazanie nietypowych subpopulacji komórkowych czy wykazanie problemów „nakładania” się populacji komórkowych, co jest niewidoczne przy zastosowaniu mniejszej ilości przeciwciał. W pracy tej dokonano retrospektywnej analizy 7-kolorowych barwień subpopulacji limfocytów krwi obwodowej (5540 pacjentów) pod kątem występowania rzadkiej populacji komórek NK, wykazujących ekspresję CD19. Komórki te w odsetku >0.39% wykryto u 1,28% badanych, a ich obecność wydaje się być stałą cechą danego pacjenta. U zdecydowanej większości tych chorych występowały nawrotowe schorzenia układu oddechowego (91%), u części potwierdzono pierwotny niedobór odporności (29%). U większości występowały również zaburzenia pozostałych parametrów immunologicznych. Co istotne, obecność tej populacji komórkowej i brak jej prawidłowej identyfikacji może znacząco wpłynąć na wynik i zaburzyć prawidłową ocenę odsetkową pozostałych populacji komórkowych. Ponadto, reanalizie poddano również 8-kolorowe barwienie subpopulacji limfocytów B u 430 pacjentów pod kątem nakładania się populacji plazmablastów na wynik limfocytów B pamięci po przełączeniu klas. W standardowym, 4-kolorowym barwieniu, nie ma możliwości prawidłowego rozróżnienia tych populacji komórkowych. Stwierdzono, że u 7,38% pacjentów podwyższony poziom plazmabalstów, w barwieniu 4 kolorowym powodowałby nieprawidłową interpretację wyniku limfocytów B po przełączeniu klas. Podwyższony poziom tych komórek nie był stałą cechą pacjenta i – przynajmniej u części pacjentów – występował w kilkutygodniowym odstępie od ciężkiej infekcji. Dzięki zastosowaniu wielokolorowych paneli przeciwciał, cytometria przepływowa bardzo korzystnie wpływa na jakość i precyzje wykonywanych analiz i wnosi dodatkowe informacje kliniczne.

Multicolor (polychromatic) flow cytometry (>8 colors) is a widely used method, not only in scientific research but also in routine testing. Owing to higher resolution, when multicolor antibody panels are applied, flow cytometry has the ability to detect atypical cell subpopulations or reveal the problem of “overlapping” of cell populations, which is undetectable when using fewer antibodies. In this study, a retrospective examination of 7-colored staining of peripheral blood lymphocyte subpopulations (5540 patients) was done on the presence of a rare subpopulation NKCD19+. These cells in the fraction of >0,39% were detected in 1,28% cases. Their prevalence seems to be a stable feature of particular patients. The majority of these patients had recurrent respiratory diseases (91%), in some cases (29%) PID was confirmed. Importantly, the presence of this subpopulation and its incorrect identification may significantly affect the result and disrupt the correct estimation of other cellular populations. Moreover, the retrospective analysis was made for 8-color staining of B-cell subpopulations (430 patients) in terms of overlapping of plasmablasts on the class-switched memory B-cells. It was found that in 7,38% of patients with an elevated level of plasmablasts, using standard 4-color staining would result in an incorrect interpretation on class-switched memory B-cells. Elevated levels of these cells were not a stable feature of particular patients and - at least in some cases - occurred within a few weeks after severe infections. When multicolor antibody panels are applied, flow cytometry affects the quality, precision of performed analyses and provides additional clinical information.