Experimental decreasing of cell size and induction of microvesicles production in the presence of procaine and the capacity of cell fragments to carry and transfer fluorescent dyes and cytostatics to target cells

Niniejsza praca przedstawia nową technikę pozyskiwania fragmentów z komórek z zastosowaniem środka znieczulającego - prokainy, której roztwór o stężeniu 16 mM powoduje rozpad komórek na fragmenty i mikropęcherzyki (microvesicles). Do badań wykorzystano komórki nowotworowe szczurzego raka prostaty lini Mat Ly-Lu . W ten prosty i bardzo wydajny sposób można otrzymać trzy frakcje pochodzące z komórek: nukleoplasty (karioplasty), czyli fragmenty komórkowe zawierające jądra oraz mikropęcherzyki – pęcherzyki o średnicy 2,8 - 3 µm ograniczone błoną komórkową i większe fragmenty bez jąder (cytoplasty). Zarówno karioplasty, cytoplasty jak i mikropęcherzyki są aktywne metabolicznie i posiadają nieuszkodzone błony komórkowe. W pracy pokazano, że mikropęcherzyki zdolne są do przenoszenia fluorochromów i cytostatyku (5-FU) i wywołania apoptozy w komórkach tego typu, z których powstały. Frakcja karioplastów morfologicznie przypomina pluripotencjalne komórki niezróżnicowane. Karioplasty szybko rozpłaszczają się na podłożu stałym, rosną i zaczynają proliferować.

This research presents a new technique for preparation of cell fragments from prostate cancer cell line Mat Ly-Lu using an anaesthetic. Procaine in 16 mM solution causes cell fragmentation. Using this simple and very efficient method one can obtain three fractions – nucleoplasts which contain cell nuclei, microvesicles (microparticles) with a diameter of 2,8 – 3 µm and enucleated cell fragments - cytoplasts. Nucleoplasts, cytoplasts and microvesicles are metabolically active and have uninjured cell membranes. The study shows that microvesicles have a capacity to transfer fluorochromes and cytostatic (5-FU) and to induce apoptosis in acceptor cells. The nucleoplasts fraction morphologically resembles pluripotent cells. Nucleoplasts adhere and spread on substratum very fast, start to grow and proliferate.