Investigation of metabolism of DL76

The subject of this work was to evaluate the intrinsic clearance of DL76, which is a selective non-imidazole antagonist of histamine H3-receptor. The study assesses the kinetics of biotransformation, using an incubation of the analyzed compound with rat liver microsomes, obtained by classical differential centrifugation. In order to study the rate of metabolism, optimal conditions (time, concentration of enzyme protein, substrate concentration) for incubation of DL76 compound were determined in an appropriate medium. Analysis of samples was performed by high performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (LC/MS/MS).The results of the initial rate of metabolic reactions were analyzed with Lineweaver-Burk method. Intrinsic clearance was calculated at 788.545 mL/min/kg. The obtained result was used to simulate hepatic clearance based on theoretical models of hepatic elimination: "well-stirred" and "parallel tube". ClH values obtained for these models were, respectively 49.56 and 58.52 mL/min/kg. The relatively low percentage of hepatic clearance in total clearance (31.9% and 37.67%) may indicate that hepatic metabolism is not only hepatic metabolism is not the only route of elimination DL76 compound from the body.

Przedmiotem badań niniejszej pracy była ocena klirensu wewnętrznego związku DL76, będącego selektywnym antagonistą receptora H3-histaminowego. W tym celu dokonano oceny kinetyki procesu biotransformacji, wykorzystując do tego celu inkubację analizowanego związku z frakcją mikrosomalną wątroby szczura, otrzymaną klasyczną metodą wirowania różnicowego.W celu badania szybkości metabolizmu ustalono optymalne warunki inkubacji badanego związku (czas, stężenie białka enzymatycznego, stężenie substratu) w odpowiednim medium. Do analizy gotowych próbek zastosowano wysokosprawną chromatografię cieczową połączoną z tandemową spektrometrią mas (LC/MS/MS).Uzyskane wyniki szybkości początkowej reakcji metabolizmu w zależności od zmian stężenia DL76 poddano analizie Lineweavera-Burka, a obliczona wartość klirensu wewnętrznego wyniosła 788,545 mL/min/kg. Otrzymany wynik został zastosowany do symulacji klirensu wątrobowego w oparciu o teoretyczne modele eliminacji wątrobowej: „well-stirred” i „paralel tube”. Uzyskane wartości ClH dla wymienionych modeli wyniosły odpowiednio 49,56 i 58,52 mL/min/kg.Stosunkowo niski udział procentowy klirensu wątrobowego w całkowitym klirensie (31,9% i 37,67%) może świadczyć, iż metabolizm wątrobowy nie stanowi jedynej drogi eliminacji związku DL76 z organizmu.