Determination of endotoxins level in BacSp222 bacteriocin preparations

Bakteriocyny to produkowane przez bakterie peptydy lub białka, zdolne do zahamowania wzrostu lub zabicia innych, blisko spokrewnionych szczepów bakteryjnych. Bakteriocyna BacSp222 to nowo odkryty peptyd, wyizolowany ze szczepu Staphylococcus pseudintermdius 222 zasiedlającego skórę i błony śluzowe zwierząt domowych. BacSp222 występuję w trzech izoformach i poza swoimi właściwościami bakteriobójczymi wykazuje właściwości prozapalne oraz w większym stężeniu, cytotoksyczne dla komórek eukariotycznych. Izolacja oraz oczyszczanie preparatu bakteriocyny niesie ze sobą spore problemy techniczne, głównie ze względu na potencjalne zanieczyszczenie bakteryjnymi endotoksynami - związkami chemicznymi o dużej różnorodności i skomplikowanej budowie. W niniejszej pracy zbadano czystość preparatu bakteriocyny BacSp222 pod kątem występowania kwasów lipotejchojowych i do tego celu posłużono się oznaczeniem całkowitym fosforu w próbce. Pierwiastek ten wybrano ze względu na jego występowanie w każdej z klas kwasów lipotejchojowych i równocześnie braku obecności w badanym peptydzie. Przed oznaczeniem konieczna była zmiana organicznego fosforu do formy nieorganicznej, wykonana dzięki trawieniu nadsiarczanem potasu. Wyniki badań potwierdzają, że otrzymywany preparat bakteriocyny BacSp222 nie zawiera endotoksyn bakteryjnych.

Bacteriocins are peptides or proteins produced by bacteria, able to inhibit or to kill closely related strains. Bacteriocin BacSp222 is a newly discovered peptide isolated from Staphylococcus pseudintermdius 222 which colonizes the skin and mucosal surfaces of household animals. BacSp222 exists in three isoforms, and beyond its bactericidal properties, 3 it has pro-inflammantory properties and, in high concentration, is cytotoxic to eucaryotic cells. The isolation and purification of bacteriocin brings significant technical challenge due to possible contamination with bacterial endotoxins, chemically diverse compunds with complex structures. In this work, the purity of the bacteriocin BacSp 222 was examinated for the presence of lipoteichoic acids by determining the total phosphorus content in the sample. This element was chosen because it is present in all classes of LTA and absent in the tested peptide. Before the determination, it was necessary to convert the organic form of phosphorus into the inorganic form, which was achieved by digestion with potassium persulfate. The results confirm that the tested bacteriocin BacSp 222 does not contain bacterial endotoxins.