MAE-UHPLC-MS method for determination of new generation antidepressant drugs (SSRI and SNRI) in bone marrow

W ramach niniejszej pracy opracowano metodę MAE-UHPLC-MS do oznaczania leków przeciwdepresyjnych nowej generacji (SSRI i SNRI) w ludzkim szpiku kostnym. Leki oznaczane w badaniach to: citalopram, fluoksetyna, paroksetyna, sertralina i wenlafaksyna. Przygotowanie próbki do analizy obejmowało homogenizację szpiku w łaźni ultradźwiękowej, ekstrakcję ciecz-ciecz, odtłuszczanie i odparowywanie w atmosferze azotu. Jako metodę ekstrakcji zastosowano ekstrakcję wspomaganą mikrofalami w temperaturze 55°C przez 14 minut w mieszaninie heksan-alkohol izoamylowy (99:1, v/v). Parametry procesu ekstrakcji optymalizowano metodą sympleksów. Podczas walidacji metody analitycznej wyznaczono następujące parametry: zakres liniowości, granice wykrywalności i oznaczalności, precyzję, odzysk, efekt matrycy oraz wydajność.Zadowalające wartości parametrów walidacyjnych pozwoliły na zastosowanie metody w analizie sekcyjnych próbek szpiku kostnego. Wykonano jakościową i ilościową analizę próbek, wyznaczając stężenia analitów zarówno na poziomie toksycznym, jak i terapeutycznym.

The main goal of the undertaken research was the development of a simple, selective and sensitive method (MAE-UHPLC-MS) to determine new generation antidepressant drugs (SSRI and SNRI) in human bone marrow. The drugs used in the studies were: citalopram, fluoxetine, paroxetine, sertraline and venlafaxine. Sample preparation includes homogenization in ultrasound bath, liquid-liquid extraction, fat removal and evaporation in nitrogen atmosphere. As a method of extraction microwave assisted extraction was applied at 55°C for 14 minutes in a mixture of heksan-isoamyl alcohol (99:1, v/v). Time and temperature of extraction has been optimized using simplex method. During the validation of analytical method these parameters were determined: linearity, detection and quantification, precision, recovery, matrix effect and efficiency.Satisfactory validation parameters allow to apply method for post mortem human samples. Quantitative and qualitative analysis has been performed to determine concentration of analytes on toxic and therapeutic levels.