Neuroblastoma jest złośliwym, najczęściej występującym nowotworem litym wieku dziecięcego. Ten pozaczaszkowy guz rozwija się z listewki nerwowej, zatem miejsce jego występowania zależy od umiejscowienia embrionalnych komórek części współczulnej układu autonomicznego. Obraz kliniczny tej choroby jest niezwykle różnorodny i zależny od umiejscowienia guza pierwotnego, jego właściwości biologicznych, zwłaszcza amplifikacji genu MYCN, oraz od obecności i miejsca występowania przerzutów. Jednym z nowych podejść terapeutycznych jest immunoterapia skierowana przeciwko gangliozydowi GD2, wykazującemu wysoką i stabilną ekspresję na komórkach neuroblastoma, a ograniczone występowanie na komórkach prawidłowych. Przedstawione badania zostały wykonane na ludzkich komórkach neuroblastoma CHP-134, charakteryzujących się amplifikacją genu MYCN oraz zmianą na krótkim ramieniu chromosomu 1. Celem niniejszej pracy było zbadanie regulacji szlaku mTOR przez przeciwciało rozpoznające gangliozyd GD2 i podwójny inhibitor tego szlaku (BEZ-235) hamujący PI3K i mTOR w ludzkich komórkach neuroblastoma. W komórkach traktowanych przeciwciałem monoklonalnym 14G2a zmiany zachodzące w tej ścieżce sygnałowej zostały zbadane poprzez analizę poziomu ekspresji kinazy mTOR oraz jej inhibitora, AMPK. Efekt działania inhibitora BEZ-235 oceniono mierząc poziom ekspresji kinazy mTOR, jej substratu p70S6K oraz białek kompleksujących z mTOR, Raptor i Rictor. Analiza ilości białka została przeprowadzona metodą western blot.Uzyskane wyniki potwierdzają hamujący wpływ przeciwciała 14G2a na proliferację komórek neuroblastoma. Blokowane są szlaki wewnątrzkomórkowe odpowiedzialne za m.in. wzrost, syntezę białek i motorykę komórkową. Potwierdzone zahamowanie kinazy mTOR prawdopodobnie związane jest z podwyższonym poziomem jej inhibitora, AMPK. Wykazano również cytotoksyczne działanie na komórki ludzkiej neuroblastoma zależne od stężenia inhibitora BEZ-235. Jego hamująca aktywność na kinazę mTOR oraz jej substrat została potwierdzona doświadczalnie.

Neuroblastoma is the most common extracranial solid tumour of childhood. It arises from embryonic cells of the autonomic nervous system. The disease is remarkable for its heterogenicity and wide spectrum of clinical behaviour. Signs and symptoms are dependent on site of primary tumour, its histolopathological properties, mainly MYCN gene amplification and presence or absence of metastatic form of the disease. Immunotherapy against GD2 ganglioside is one of the newly developed therapies. GD2 ganglioside is expressed on tumour cells, while its expression on normal cells is restricted. Present study has been performed on human CHP-134 neuroblastoma cell line, that is characterised by MYCN gene amplification and alteration of the short arm of the chromosome 1.The goal of this study was to investigate the regulation of mTOR signalling pathway by anti-GD2 ganglioside antibody and mTOR inhibitor (BEZ-235) in human neuroblastoma cell line. Changes in this particular network in cells treated with monoclonal antibody 14G2a were measured by evaluation of mTOR kinase and its inhibitor, AMPK, expression level. The effect of dual inhibitor BEZ-235 on cells was evaluated by expression level of mTOR kinase, its substrate p70S6K and mTOR associating proteins, Raptor and Rictor. Changes in protein levels were measured by western blot analysis. The results of study have shown that the treatment with 14G2a antibodies inhibits neuroblastoma cells proliferation through blockage of the intracellular pathway that impact most major cellular functions like cell growth, protein synthesis and cell motility. Inhibition of mTOR kinase is probably due to elevated levels of its inhibitor, AMPK. Cytotoxic dose-dependent effects of inhibitor BEZ-235 have been confirmed. The experiments showed its inhibitory influence on mTOR kinase and its substrate.