Analysis of FT-IR spectra of microvesicles from culture of tumor cell lines (melanoma)

Niniejsza praca przedstawia wyniki otrzymane na podstawie analizy i porównania widm FT-IR mikropęcherzyków zewnątrzkomórkowych (EVs), tak zwanych egzosomów i ektosomów pochodzących z hodowli linii komórek nowotworowych (melanoma). Badania prowadzono na linii komórek melanocytów ludzkich HEMa-LP oraz dwóch liniach komórkowych czerniaka ludzkiego złośliwego (melanoma): WM-115 i WM-266-4. EVs uzyskano z pożywki z zastosowaniem metod filtrowania i wirowania różnicowego. Zapisy widm uzyskano z próbek przy użyciu spektroskopu furierowskiego wyposażonego w przystawkę ATR. Otrzymane widma FT-IR wykazały obecność w badanych próbkach takich wiązań charakterystycznych jak Amid I, II, III, amid A i B, białka oraz lipidy. Zauważono również różnice w widmach, polegające na innych wartościach intensywności względnej poszczególnych pasm. Najwyższą intensywnością względną charakteryzowało się pasmo Amidu I. Wykazano skuteczność zastosowanych metod do pozyskania i analizy widm FT-IR EVs.

This paper presents the results obtained from analysis and comparison of FT-IR spectra of extracellular microvesicles (EVs), so-called exosomes and ectosomes derived from cultured tumor cell lines (melanoma). The research was carried out on the human HEMa-LP melanocyte cell line and two human malignant melanoma cell lines: WM-115 and WM-266-4. The EVs were obtained from the medium using filtration and differential centrifugation methods. Spectrum records were obtained from samples using a furrier-transformed spectrometer equipped with an ATR device. The obtained FT-IR spectra showed the presence of such bonds as Amid I, II, III, amide A and B, proteins and lipids in the tested samples. Differences in spectra were also observed, which consisted of different relative intensity values of individual bands. The highest relative intensity was characterized by the Amide I band. The effectiveness of the methods used to obtain and analyze the FT-IR EVs spectra has been demonstrated.